Efectos del talio sobre la señalización mediada por ATP extracelular en células PC12

SALVATIERRA FRÉCHOU DM; ALVAREZ CL; SCHWARZBAUM PJ; VERSTRAETEN SV

Santiago del Estero

Congreso; XLIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2015

Sociedad Argentina de Biofísica

El talio (Tl) es un metal que tiene dos estados deoxidación, Tl(I) y Tl(III), los cuales causan apoptosis en células de la línea PC12.El Tl podría afectar la homeostasis del ATP extracelular (ATPe) el cual, através de la interacción con receptores purinérgicos, podría activar cascadasde señalización pro-apoptóticas o ser hidrolizado y removido del medio extracelularpor una o varias ectonucleotidasas con actividad ectoATPasa. La exposición de las células PC12 al Tl(III) ?pero no alTl(I)? causó la liberación de ATPe con una velocidad inicial (Ji) aparente de432±122 nM ATP/min/106 cel. El valor de Ji disminuyó a 70±24 nMATP/min/106 cel con carbenoxolona (inhibidor de los canales depannexina-1) y a 139±31 nM ATP/min/106 cel con brefeldina A(inhibidor de exocitosis). El efecto del Tl sobre la actividad ectoATPasa fue evaluadoa concentraciones nM de ATPe (vi) y en condiciones de velocidad máxima (Vmax). Elvalor de vi/[ATPe] se utilizó como un estimador de la constante catalíticaaparente (Kcat app). Las células PC12 exhibieron vi a concentracionesfisiológicas de ATPe (25-100 nM), con una Kcat app de 0.11±0.03 min/106cel. El valor de vi fue mayor en las células expuestas al Tl(I) (Kcat app:0.22±0.03 min/106 cel) y menor en las expuestas al Tl(III) (Kcat app:0.04±0.01 min/106 cel). Utilizando el quelante DTPA demostramos que elefecto inhibitorio del Tl(III) sobre la vi es irreversible. El Tl(I) y Tl(III)no afectaron a la Vmax. Todo esto sugiere que el Tl(III) promueve la liberación deATP a través de al menos dos vías, por canales de panexina-1 y por exocitosis. El Tl(III) también aumenta la vida media del ATPeliberado al inhibir de manera irreversible la vi. Por otro lado, el Tl(I) no afectaJi pero, al aumentar la vi, disminuye la vida media del ATPe y por ende laduración de las señales gatilladas por el nucleótido. Financiadopor UBA (20020130100195BA), CONICET (PIP112-201101-00639) y ANPCyT(PICT-2013-1018).