Rol de las subunidades Fksp del Complejo 1,3-beta-D Glucansitasa de Candida glabrata sobre la producci¨®n de biofilm y la interacci¨®n con c¨¦lulas inmunes.

RODRIGUEZ, EMILCE; DUDIUK, CATIANA; MIR¨®, SOLEDAD; GAMARRA, SOLEDAD; VIGEZZI, CECILIA; ICELI, PAULA; RIERA, FERNANDO; CAEIRO, JUAN PABLO; GARCIA, GUILLERMO; SOTOMAYOR, CLAUDIA

Congreso; XVI Congreso de la Sociedad Argentina de Infectologia (SADI); 2016

Introducci¨®n: Candida glabrata es el segundo agente causal de candidemias a nivel mundial, siendo s¨®lo superada porC. albicans. Las equinocandinas son consideradas como la primera opci¨®n para el tratamiento de candidiasis invasorapor C. glabrata. Estas drogas act¨²an inhibiendo las subunidades Fksp (codificadas por los genes FSK1, FKS2 y FKS3)del complejo enzim¨¢tico 1,3-¦Â-D Glucansintasa responsable de la s¨ªntesis del componente principal de la pared celularf¨²ngica, los 1,3-¦Â-D glucanos. La resistencia cl¨ªnica de C. glabrata a las equinocandinas ha sido relacionada conmutaciones en FKS1 y FKS2, pero la participaci¨®n individual de cada uno de los genes FKS en la virulencia de estalevadura y su efecto sobre la activaci¨®n y estimulaci¨®n de c¨¦lulas inmunes no ha sido estudiada.Objetivo: Evaluar el impacto de la deleci¨®n de los genes FKS1, FKS2 y FKS3 de C. glabrata en la producci¨®n defactores de virulencia como la capacidad formadora de biofilm y en la inducci¨®n de mediadores inmunes en macr¨®fagosen cultivo.Materiales y M¨¦todos: Se generaron mutantes de C. glabrata defectivos en los genes FKS1, FKS2 y FKS3, utilizando elgen URA3 como casete de selecci¨®n por tres t¨¦cnicas distintas: PRODIGE, PCR de fusi¨®n y con enzimas de restricci¨®n,respectivamente. La transformaci¨®n de las levaduras se realiz¨® por la t¨¦cnica de Acetato de Litio utilizando como cepaparental C. glabrata LMDM331 (ATCC 90030 ¦¤URA3). La capacidad formadora de biofilm (CFB) de las cepas en estudiose evalu¨® por el m¨¦todo colorim¨¦trico de XTT y de acuerdo al desarrollo, fueron clasificadas como Baja, Moderada y AltaCFB. Para los estudios In vitro se utiliz¨® una l¨ªnea celular de macr¨®fagos(Ma) murinos(RAW); las c¨¦lulas se incubaroncon cada cepa a dos relaciones pat¨®geno:Ma (1:1 y 5:1) durante 24 hs. Posteriormente, la expresi¨®n de transcriptos decitoquinas proinflamatorias(IL1beta, IL6 y TNFalfa) y antiinflamatorias(IL10 y TGFbeta) se evalu¨® en las c¨¦lulas inmunesmediante la t¨¦cnica de PCR. C.albicans SC5314 se incluy¨® como cepa de control en todos los estudios.Resultados: La capacidad de las especies de Candida de adherirse tanto a superficies biol¨®gicas como inertesmediante la formaci¨®n de biofilm es considerada un importante factor de virulencia. Mientras que C. albicans exhibi¨®una alta CFB, C. glabrata ¦¤URA3 fue clasificada como productora moderada (p