Evaluación del Virus Bovino Herpes 4 en Rodeos Lecheros de los Departamentos Castellanos y las Colonias de la Provincia de Santa Fe. Estudio Preliminar

DE BECK A; FERREIRA M; VERNA AE; KNOWLES D; GOLLÁN A; THOMPSON C; ODEÓN A; ECHAIDE I

Congreso; XX Reunión Científico-Técnica de la Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico; 2014

 Introducción  El herpesvirus bovino 4 (BoHV-4), ha sido aislado de bovinos con diferentes patologías en vías respiratorias y tracto reproductivo. En este último asociado a endometritis, vaginitis y abortos. Sin embargo este herpesvirus gamma, perteneciente al género Rhadinovirus y sin relación genética cercana con otros virus herpes de la familia Bovidae, también ha sido aislado de bovinos clínicamente sanos.  Los escasos eventos clínicos en los que se pudo comprobar su acción patógena directa, sugieren que con mayor frecuencia facilitaría el efecto de infecciones secundarias. En forma similar a otros virus herpes persiste en forma latente después de infecciones naturales y experimentales. La latencia se produce en células linfoides mononucleares y la reactivación es inducida por factores estresantes. En los bovinos portadores se mantienen niveles detectables de anticuerpos específicos, que sin embargo no impiden las re-infecciones. En Argentina el BoHV-4 ha sido aislado de fetos abortados, y de mucosa nasal, leucocitos o semen. Los objetivos de este proyecto son i) determinar la prevalencia en BoHV-4 en algunos rodeos lecheros de  cercanos a la EEA del INTA en Rafaela e intentar el aislamiento de cepas in vitro, y ii) caracterizar las cepas aisladas mediante el análisis de su comportamiento biológico y su perfil molecular. En este trabajo se presenta información preliminar del primer objetivo.  Materiales  y  métodos Se seleccionaron 18 rodeos de bovinos Holando Argentino de los Dptos. Castellanos y Las Colonias de la provincia  de Santa Fe. De cada rodeo se obtuvieron entre 17 y 30 muestras de sangre con y sin anticoagulante (n=476), de vacas que estaban en el último tercio de gestación. Para ello se obtuvo la colaboración de los Médicos Veterinarios, asesores de estos rodeos. Se obtuvieron los antecedentes reproductivos de cada vaca muestreada. Todas las muestras de suero se analizaron mediante un ELISAi comercial siguiendo el protocolo recomendado (Bio K 312, Bio X Diagnostics, Bélgica). El ADN extraído de alícuotas de sangre completa de cada animal (n=382) fue sometido a una nested-PCR utilizando los primers externos BoHV4-F GTTGGGCGTCCTGTATGGTAGC y BoHV4-R ATGTATGCCCAAAACTTATAATATGACCAG, e internos BoHV4-F TTGATAGTGCGTTGTTGGGATGTGGT y BoHV4-R CACTGCCCGGTGGGAAATAGCA. Después del parto se obtuvieron muestras de contenido uterino de un número variable de vacas de cada rodeo. Estas muestras se tomaron de la cavidad uterina utilizando pipetas de Cassou después de higienizar la región perineal. El mucus se descargó en tubos con el medio comercial MEM (Gibco; LifeTechnologies) con el agregado de antibióticos. Las muestras se transportaron refrigeradas y se almacenaron congelados a -70°C después de dividirlas en dos alícuotas. Se procesaron mediante nPCR sólo 67 muestras de mucus cervico-vaginal (MCV), pertenecientes de 7 rodeos, y de estas 50 fueron cultivadas en células MDBK en el medio MEM con antibióticos. Resultados La prevalencia serológica de BoHV-4 en el total de bovinos analizados fue de 63,4% (n=302) y en todos los rodeos hubo al menos 1 vaca reactora. Se pudieron amplificar secuencias del BoHV-4 en el 42,4% de las muestras de sangre analizadas mediante nPCR (n =145). Los rodeos fueron agrupados en 3 niveles de acuerdo a la prevalencia serológica y la proporción de muestras positivas a n-PCR (Tabla 1). En 9 de 67 (13%) muestras de MCV, se amplificó un fragmento específico de BoHV-4. A su vez se lograron aislamientos de 4 muestras pertenecientes a un mismo rodeo. Las vacas de las que se obtuvieron esas muestras no tenían antecedentes de patologías reproductivas. De estas, dos fueron ELISA positivo y dos ELISA negativo. A su vez de cada uno de estos pares, sólo se pudo amplificar un fragmento específico mediante nPCR de la sangre de una de las vacas. El 58% de las vacas analizadas en este rodeo fue nPCR positivo en MCV. El resto de rodeos (6) analizados hasta el momento, fueron nPCR negativos excepto uno  que fue MCV positivo en el 18%.  Cuando se compararon los intervalos entre partos el promedio de las vacas con aislamiento fue de 476 días y el de las 26 vacas restantes, 390 días. Discusión y conclusiones  El rol del  virus BoHV-4 como causa primaria de desórdenes reproductivos aun no se ha dilucidado. En Argentina el virus ha sido aislado de fetos abortados y fue identificado en sangre en del 63,4% de vacas lecheras de un rodeo con problemas reproductivos. En el presente estudio el virus fue aislado del mucus cérvico-vaginal de 4 vacas de un mismo rodeo. Ninguna de las vacas tenía antecedentes de endometritis ni de otros desordenes reproductivos, y los partos fueron normales, sin embargo hubo mayor tiempo promedio parto-parto, que el resto de las vacas analizadas.  Interesantemente en este rodeo, el 58% de las vacas eliminaba el virus con el MCV, contrastando con las vacas de los 6 rodeos restantes. La detección de reactores seropositivos al virus BoHV-4 observada en todos los rodeos analizados y la elevada sero prevalencia de la mayoría de los rodeos indicó la endemicidad de este virus en la cuenca lechera santafecina.     Bibliografía Pérez, S.; Verna, A.; Leunda, M.; Favier.; Ceriani, M.; Morán, P.; Odeón, A.; Esteban, E. (2011). Occurrence of bovine herpesvirus type 4 DNA in Argentinean Holstein cattle from Santiago del Estero, Argentina. Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci., 48:454-463.   Verna, A.E.; Manrique, J.M.; Pérez,  S.E.; Leunda, M.R.; Pereyra, S.B.; Jones, L.R.; Odeón, A.C. (2012). Genomic analysis of bovine herpesvirus type 4 (BoHV-4) from Argentina: High genetic variability and novel phylogenetic groups. Vet. Microbiol. 160:1-8.