INFECCION EXPERIMENTAL DE TERNEROS CON HERPESVIRUS BOVINO 4

VERNA AE; PEREZ, SE; LEUNDA MR; MORAN P; GONZALEZ ALTAMIRANDA E; FIORINI F; ARAOZ V; MARIN MS; PEREYRA S; ODEON ANSELMO

Congreso; XX Reunión Científico-Técnica de la Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico; 2014

Introducción. El herpesvirus bovino 4 (BoHV-4) pertenece a la familia Herpesviridae, subfamilia Gammaherpesvirinae, género Rhadinovirus (Zimermann et al., 2001). En Argentina, BoHV-4 se aisló y caracterizó molecularmente en el año 2007, a partir de muestras de vacas abortadas remitidas al Servicio de Diagnóstico Veterinario Especializado (SDVE) del INTA Balcarce (Verna et al., 2008). Desde el año 2008-2013 se registraron nuevos casos en la Provincia de Buenos Aires, donde la principal problemática se asoció con hembras bovinas abortadas. También se han obtenido aislamientos de BoHV-4 a partir de células de la granulosa de ovocitos provenientes de ovarios de matadero utilizados para realizar fecundación in vitro, de hisopados nasales (bovinos y búfalos) y de semen congelado perteneciente a un centro de reproducción. En el 2012 se efectuó  la caracterización molecular de cepas aisladas de hembras bovino abortadas, donde se describe la existencia en Argentina de cepas compatibles al prototipo Movar 33/66, al Americano DN599, detectándose un nuevo prototipo -Genotipo 3-, sólo descripto en Argentina (Verna et al., 2012). Estos resultados sugieren un contexto epidemiológico complejo para las cepas de BoHV-4 circulantes en Argentina. El principal objetivo de este estudio fue evaluar la patogenicidad de dos cepas de BoHV4 genéticamente diferentes en terneros infectados experimentalmente. Materiales y Métodos. Se utilizaron 15 terneros, divididos aleatoriamente en 3 tres  grupos de 5 animales cada uno. Todos los animales fueron seronegativos a herpesvirus bovino tipos 1 y 5. Los grupos 1 y 2 fueron inoculados vía intranasal con las cepas 07/435 (106.87TCID50/ml)  y 10/154 (104.87TCDI50/ml), molecularmente  caracterizadas como genotipo 3 y prototipo Americano DN599, respectivamente. A fin de evitar infecciones Se colectaron muestras de sangre con anticoagulante para obtener leucocitos, hisopados nasales y oculares durante los días  (0.1.2.4.5.6.7.8.9.10.11.14 y 25), las que se destinaron a aislamiento viral y detección de ADN viral por PCR para el gen B y nested PCR para los primers B4low/B4up. Se realizó seroneutralización a partir de sueros, por el método suero variable y virus fijo, 2000 TCID50/ml, con el objetivo de evaluar la presencia de anticuerpos para los tiempos 4.7.14 y 25 post-desafío. Resultados. Los resultados de los aislamientos y detección de ADN viral se presentan en la Tabla 1. Ambas cepas se aislaron de los animales inoculados, observándose diferencias entre los grupos en cuanto a la muestra de origen (hisopado ocular y/o hisopado nasal). Todos los aislamientos fueron corroborados mediante PCR resultando todos positivos.  Aunque no se logró aislar el virus a partir de leucocitos circulantes, se detectó ADN viral en ambos grupos en los tiempos 7 y 14 post-desafío. Se detectaron anticuerpos neutralizantes a la cepa 07/435 con sueros desafiados con la cepa homóloga (título máximo 1:64), observándose seroconversión en un ternero a los 25 días post-infección y en el grupo infectado con la cepa 10/154 el título neutralizante máximo fue 1:16, mientras que no se detectaron anticuerpos neutralizante a la cepa 10/154 en los tres grupos. Discusión. En el presente trabajo se demostró que las cepas de BoHV4 utilizadas fueroncapaces de replicar en los terneros, lográndose el aislamiento viral esporádico de hisopados nasales y oculares durante al menos 14 días post-infección.El resultado relevante de este estudio fue la capacidad de detectar anticuerpos neutralizantes en los terneros infectados experimentalmente con la cepa 07/435, filogenéticamente caracterizada como Genotipo 3 y no detectándose con la cepa 10/154 que corresponde al prototipo Americano, resultados concordantes con otras investigaciones utilizando la cepa DN-599 (Mohanty et al., 1972). Los resultados obtenidos abren un interrogante sobre la naturaleza del mecanismo responsable de la respuesta humoral. Aunque la razón de losbajos títulos a BoHV-4 (1:64) no son claros, estos hallazgos son consistentes con los reportados con una cepa endometriotrópica de BoHV-4 Europea (Wellemans et al., 1986).En este estudio se confirma una significativa diferencia en la variabilidad genómica entre las cepas utilizadas, sugiriéndose nuevos estudios para lograr unamejor comprensión de los fenómenos involucrados en la inmunidad delas infecciones causadas por BoHV4. Bibliografía. 1. Zimmermann W, Broll H, Ehlers B, Buhk HJ, Rosenthal A, et al. (2001) Genome sequence of bovine herpesvirus 4, a bovine Rhadinovirus, and identification of an origin of DNA replication. J Virol 75: 1186?119. 2. Verna AE, Leunda MR, Louge Uriarte EL, Lomónaco M, Pereyra SB, Odeón AC. 2008. First virologic evidence of  Herpesvirus bovino tipo 4 (BoHV-4) en Argentina. Rev. Arg. Microbiol. 40(1):54-55.  3. Verna AE; Manrique JM; Pérez SE; Leunda MR; Pereyra SB; Jones LR; Odeón AC. 2012. Genomic analysis of bovine herpesvirus type 4 (BoHV-4) from Argentina: high genetic variability and novel phylogenetic groups. J Vet Microbiol. 9; 160(1-2):1-8. 4. Mohanty SB, Lillie MG, Ingling AL, Hammond RC. 1972. Effects of an experimentally induced herpesvirus infection in calves. J Am Vet Med Ass, 161, 1008-1011. 5. Wellemans G, Van Opdenboch E, Mammerickx M. 1986. Experimental inoculation of bovine herpesvirus 4 (str. LVR 140) in pregnant and nonpregnant cows. Ann Rech Vet 17:89-94