INVESTIGADORES
VERNA Andrea Elizabeth
congresos y reuniones científicas
Título:
Detección de los herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) y 5 (BoHV-5) en el sistema nervioso central del bovino
Autor/es:
RENSETTI, D; MORÁN, P; MARIN MS; VERNA AE; ODEON ANSELMO; PEREZ, SE
Reunión:
Congreso; XX Reunión Científico-Técnica de la Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico; 2014
Resumen:
Introducción
El herpesvirus bovino tipo 1(BoHV-1) es un
alfa-herpesvirus responsable de diversos síndromes en el ganado, incluyendo
enfermedad respiratoria, abortos y trastornos reproductivos. El herpesvirus
bovino tipo 5 (BoHV-5), un alfa-herpesvirus estrechamente relacionado y
previamente clasificado como BoHV-1.3, es el agente causal de
meningoencefalitis necrotizante
no
supurativa en terneros, una condición altamente prevalente en América del Sur.
A diferencia del BoHV-5, el BoHV-1 sólo se reportaba esporádicamente como responsable
de encefalitis en bovinos. Sin embargo, trabajos recientes identificaron a este
virus como una causa frecuente de encefalitis en el ganado y demostraron que la
participación del BoHV-1 en la enfermedad neurológica no es un evento raro. El propósito
de este estudio fue determinar y comparar la presencia y la distribución de
ambos alfa-herpesvirus en el sistema nervioso central (SNC) de bovinos
inoculados experimentalmente. Materiales y métodos. En este
estudio
se utilizaron 14 terneros de 1 año de edad. Todos los animales eran
seronegativos a BoHV-1 y BoHV-5. Los terneros fueron inoculados intranasalmente
mediante aerosolización con 10 ml de la cepa Cooper de BoHV-1 o de la cepa
97-613 de BoHV-5. Los animales se agruparon al azar de la siguiente manera:
Grupo 1 (n = 4) destinado al estudio de infección primaria (aguda), Grupo
2 (n = 4) al estudio de latencia, Grupo 3 (n = 4) al estudio de
reactivación de la latencia y el Grupo 4 fue el grupo control (n = 2).
Los terneros en el Grupo 1 fueron inoculados con 106.3
dosis infectivas en cultivo celular 50(DICC50)
de las cepas Cooper (2 terneros) o 97-613 (2 terneros) para inducir la
infección primaria aguda. La eutanasia se realizó a los 6 días post-inoculación
(dpi).
Los
terneros en el Grupo 2 fueron inoculados con 103DICC50
de las cepas Cooper o 97-613 para inducir lainfección latente. Los terneros en el Grupo 3
recibieron el mismo inóculo que los del Grupo 2. A los 21 dpi estosterneros recibieron un tratamiento con dexametasona(DEX) para inducir la reactivación viral. La eutanasia
se realizó a los 25 dpi. Los terneros no infectados seinocularon con medio de cultivo. La eutanasia de unanimal se realizó a los 6 dpi y la del otro ternero a
los 2 días post-reactivación. A la necropsia se colectaronmuestras de cerebro para aislamiento viral y PCR. Seevaluaron las siguientes áreas: corteza anterior,
incluyendo
corteza olfatoria (muestra 1), corteza frontal (muestras 2 y 3) y corteza
dorso-lateral (muestra 4); corteza posterior, incluyendo el área del surco
marginal (muestra 5) y ectomarginal (muestra 6); cerebelo (muestra 7); médula
cervical (muestra 8); médula oblonga (muestra 9), puente (muestra 10) y
diencéfalo (muestra 11). Además, se tomaron muestras de ganglio trigémino (GT).
El aislamiento viral se realizó sobre células MDBK. Las técnicas de nested PCR
descriptas por Wang et al. (2001) (gD BoHV-1) y Mayer et al. (2006)
(gB BoHV-5) se usaron para la detección de ADN viral en tejido nervioso. Resultados
y Discusión.
Durante
la infección aguda (6 dpi) se aisló BoHV-1 en tejido nervioso de ambos terneros
inoculados. Los títulosvirales más elevados se detectaron en la corteza olfatoria,
surco ectomarginal de la corteza posterior, puente y diencéfalo. En el caso de
los terneros inoculados con BoHV-5 no fue posible aislar el virus de ninguna
muestra de tejido nervioso. Sólo se detectó virus
infeccioso
en el GT de uno de los terneros inoculados. Como era esperado, el BoHV-1 o el
BoHV-5 no se aislaron de las muestras de los terneros latentemente infectados
ni de los terneros sin infectar. El BoHV-1 no se aisló de los tejidos de los
animales que recibieron DEX. Sin embargo, el BoHV-5 se aisló a partir de
corteza frontal, dorso-lateral y posterior luego de inducida la
reactivación.
El título viral más elevado se detectó en corteza frontal. El ADN de BoHV-1 y
BoHV-5 se detectó consistentemente en varias áreas del SNC, incluyendo médula
cervical y médula oblonga de los terneros infectados en forma aguda. A diferencia
del BoHV-1, el ADN de BoHV-5 se detectó en varias regiones del cerebro y en el
GT de terneros latentemente infectados y de terneros que recibieron DEX. Los
resultados de este estudio demuestran que el BoHV-1 es capaz de replicarse en
forma aguda en el cerebro bovino y que el aislamiento de virus a partir de este
tejido resulta más fácil que el aislamiento de BoHV-5. La dificultad en el
aislamiento
de BoHV-5 en tejido nervioso se reportó previamente (Belknap et al., 1994,
Pérez et al., 2002). A pesar de la factibilidad de aislar BoHV-1 de tejido nervioso,
es interesante destacar que la encefalitis por BoHV-1 no es tan frecuentemente
reportada como la causada por BoHV-5. Durante la latencia y la reactivación, la
distribución del ADN de BoHV-5 en el tejido nervioso fue más amplia que la del
BoHV-1 y es consistente con la reactivación clínica leve que puede observarse
en el ganado en este estadio de la infección con BoHV-5. Además, los resultados
de este estudio enfatizan la importancia de usar técnicas moleculares para el
diagnóstico de la encefalitis por herpesvirus en el ganado. Referencias. 1.Belknap
et al. 1994. Experimental
infection
of neonatal calves with neurovirulent bovine herpesvirus type 1.3. Vet Pathol.
31, 358?365. 2. Campos F. et al., 2009. Vet Microbiol. 139: 67-73. 3.Pérez,
S., Bretschneider, G., Leunda, M. et al., 2002. Primary infection,
latency and reactivation of Bovine Herpesvirus Type 5 (BVH-5) in the bovine
nervous system. Vet Pathol 39, 437?444. 4.Wang P. et al., 2001.
Detection of bovine herpesvirus-1 in peripheral blood mononuclear cells eight
months postinfection. J Vet Diagn Invest, 13, 424-427.