Inducción de Apoptosis en Células de Granulosa Bovina por disrupción de las uniones celulares Calcio dependientes

ANGIONO, GM.; LOMBARDO, DM.

UNCPBA, Tandil, Pvcia.de Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Ciencias Morfológicas.; 2006

&lt;!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-unhide:no; mso-style-qformat:yes; mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman","serif"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} .MsoChpDefault {mso-style-type:export-only; mso-default-props:yes; font-size:10.0pt; mso-ansi-font-size:10.0pt; mso-bidi-font-size:10.0pt;} @page WordSection1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.WordSection1 {page:WordSection1;} --&gt; INDUCCION DE APOPTOSIS EN CÉLULAS DE GRANULOSA BOVINA POR DISRUPCIÓN DE LAS UNIONES CELULARES CALCIO DEPENDIENTE   Angiono GM., Lombardo, DM. Cátedra de Histología y Embriología, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA.   La adhesión celular es necesaria para la organización de las células granulosas (CG). El Ca++ cumple un importante rol estabilizando uniones celulares, por ejemplo las mediadas por  caderina. Alteraciones a este nivel generan cambios celulares que posiblemente conduzcan a apoptosis.  El objetivo del trabajo fue establecer in vitro la relación entre la pérdida de los contactos calcio dependiente con la integridad y la apoptosis de las CG. El modelo de estudio fue una línea celular de CG bovina las cuales fueron tratados con EGTA (quelante exclusivo de Ca++), con el fin de lograr la disrupción de las uniones hemofílicas Ca++ dependientes mediadas por Caderina-E. Para esto se determinó viabilidad celular (VC) por exclusión con azul Tripan, e índice de apoptósis (IA) mediante la tínción cromatínica de  DAPI y TUNEL. Los tratamientos realizados fueron con  EGTA 100 nM, 9 nM y sin EGTA. Paralelamente se  determinó el rol de la deprivación de suero, realizando el mismo estudio en cultivos con y sin suero fetal bovino (SFB) al 5%. Los datos fueron analizados estadísticamente mediante un diseño factorial 2x3. Si bien los tratamientos generan cambios evidentes de apoptósis, en los diferentes tratamientos con EGTA, no hay diferencias estadísticamente significativas entre los porcentajes de VC promedio y entre los IA  determinados por DAPI. Las determinaciones por TUNEL validan los cambios de apoptosis evidenciados por DAPI. Para los tratamientos con y sin SFB si, se observaron diferencias significativas (p<0.051) entre los porcentajes de VC promedio, como también para los IA (p<0.054). Dado que el factor suero debe ser tenido en cuenta en el estudio de la apoptosis, también se ha analizado el efecto de la EGTA a distintas concentraciones de SFB. El estudio de la disrupción de las uniones Ca++ dependientes y la apoptosis en este modelo requiere de  técnicas más sensibles y específicas.   Palabras Claves: Células de Granulosa; Apoptosis; EGTA; SFB; Caderina