DESARROLLO DE UN SISTEMA BASADO EN PCR DE TIEMPO REAL PARA LA DETECCIÓN Y SEROTIPIFICACIÓN DEL VIRUS DENGUE

LIONEL URAN LANDABURU; DIEGO MENGUAL GOMEZ; DANIEL GHIRINGHELLI; BILEN MARCOS

Buenos Aires

Congreso; Congreso argentino y latinoamericano de Virología; 2015

La fiebre del Dengue es una enfermedad endémica en Sudamérica. En 2014 se han confirmado, según datos de la Organización Panamericana de la Saud, más de 600.000 casos tan solo en Argentina, Brasil, Paraguay, Chile y Uruguay.El agente etiológico de la fiebre del Dengue es un virus perteneciente a la familia Flavivirdae conocido como Virus Dengue. Éste presenta 4 serotipos distintos. En Argentina, las metodologías de diagnóstico más utilizadas se basan en ensayos serológicos, cultivo celular en células C6/36, o análisis molecular mediante RT-PCR. El empleo de metodologías de PCR en tiempo real para la detección del Dengue, tiene una aplicación limitada en los centros de salud de nuestro país debido a los altos costos de los reactivos y el equipamiento necesario.Este trabajo presenta el desarrollo de un sistema de detección basado en qPCR, donde se utilizaron primers y sondas de diseño original y componentes de reacción producidos localmente.Los primers y sondas utilizadas fueron diseñados a partir de un análisis bioinformático exhaustivo, contemplando 80-90 secuencias de genomas completos de cada serotipo viral, en el que se detectaron potenciales regiones de interés para ensayos moleculares. Se utilizó esta información para generar oligonucleótidos consenso y serotipo-específicos. A su vez, se generaron clones de cDNA de cada serotipo viral correspondientes a las regiones reconocidas como blanco. Dichos clones fueron utilizados como molde de PCR durante el subsiguiente proceso de evaluación de la especificidad, sensibilidad y estabilidad del sistema. Por otro lado, para evaluar la eficiencia general, se comparó la mezcla de reacción contra otros productos comerciales.Como resultado de este trabajo se destaca la obtención de un sistema optimizado para la detección y sero-tipificación del virus Dengue, utilizando una mezcla de reacción diseñada ad hoc y valiéndose de componentes originales y producidos localmente. El sistema mostró un 100% de especificidad de serotipo y una sensibilidad suficiente para la detección de 10-100 moléculas blanco. Adicionalmente, las pruebas de estabilidad mostraron que la mezcla de reacción desarrollada conserva sus propiedades hasta 6 meses (almacenada a -20ºC) y los análisis comparativos resultaron satisfactorios, presentando una eficiencia comparable a la obtenida con otros productos comerciales.