DIAGNÓSTICO RÁPIDO DE LA RESISTENCIA CLÍNICA A LAS EQUINOCANDINAS EN CANDIDA ALBICANS UTILIZANDO UNA HERRAMIENTA MOLECULAR

DUDIUK, CATIANA; LEONARDELLI, FLORENCIA; GAMARRA, SOLEDAD; GARCIA, GUILLERMO

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de la Sociedad Argentina de Infectología; 2015

Sociedad Argentina de Infectología

Introducción: Introducción: Las infecciones invasivas por Candida albicans se presentan como uno de los problemasclínicos más significativos en inmunocomprometidos. Las equinocandinas son el tratamiento de elección para estasinfecciones. Sin embargo, el aumento de su prescripción ha provocado la selección de cepas resistentes. Por esto, laevaluación de la sensibilidad a estos antifúngicos en el laboratorio por los métodos de referencia es consideradaimprescindible para guiar las decisiones terapéuticas. Sin embargo, no se utilizan habitualmente en los hospitales debidoal tiempo y al costo que implican. Sumado a esto, se sabe que no existe una correlación estricta entre los valores deCIM a las equinocandinas y los resultados terapéuticos. Por el contrario, la resistencia clínica de C. albicans a lasequinocandinas tiene una relación directa con la presencia de sustituciones de aminoácidos en dos regiones (hot spot)de la subunidad Fks1p del complejo β-D-1,3-glucan sintasa (blanco de las equinocandinas). Por esta razón, la detecciónde estas mutaciones se considera el método más objetivo para predecir la respuesta que tendrá un tratamiento conequinocandinas.Objetivo: Objetivo: Desarrollar y evaluar un método molecular capaz de detectar con rapidez y precisión las mutacionesen el gen FKS1 de Candida albicans implicados directamente en la resistencia clínica a las equinocandinas.Materiales y Métodos: Materiales y Métodos: Se desarrolló una técnica de PCR clásica multiplex con primersdiseñados de manera que el extremo 3´ de los mismos coincida con la posición donde se encuentran los nucleótidos quepueden mutar y dar el fenotipo de resistencia. Así, esta reacción de PCR dio resultados positivos solo cuando la cepa enestudio no presentaba mutaciones en FKS1 y por lo tanto es sensible a las equinocandinas. Para confirmar la utilidad dela técnica, se realizó un estudio doble ciego utilizando 50 C. albicans aisladas de pacientes con enfermedad fúngicainvasora probada. De estas, 11 cepas presentaban mutaciones homocigotas y 2 heterocigotas en las regiones hot spotdel gen FKS1. Los resultados fueron comparados con los valores de sensibilidad in vitro y de secuenciación de losgenes FKS.Resultados: Resultados: De las 50 muestras analizadas, 37 cepas se caracterizaron correctamente como sensibles y11 como resistentes a las equinocandinas. En las dos cepas restantes obtuvimos un falso resultado, presentándosecomo sensibles a equinocandinas cuando en realidad se trataba de mutantes heterocigotas (S645S/P y R1361R/H) confenotipo de sensibilidad intermedia a las equinocandinas.Conclusiones: Conclusiones: La metodología descrita es capaz de establecer en solo 4 hs la sensibilidad de C.albicans a las equinocandinas, detectando las mutaciones en el gen FKS1 que se relacionan estrictamente con estefenotipo. Las ventajas con respecto a los métodos de referencia son: la rapidez, la objetividad, el bajo costo (5 dólares),la posibilidad de ser utilizada directamente sobre muestras clínicas (sin cultivo) y la mejor correlación con los fallosterapéuticos. La limitación de esta técnica es la incapacidad de detectar mutaciones heterocigotas en los hot spots delFKS1. Sin embargo, la frecuencia de este genotipo es bajo, registrándose pocas cepas en la bibliografía.