Primeras aproximaciones al estudio de la asociación funcional entre las enzimas fumarasa y málica en Arabidopsis

JUAN PABLO ZUBIMENDI; FERNANDO MUZZOPAPPA ; MARÍA FABIANA DRINCOVICH; CARLOS SANTIAGO ANDREO; MARCOS ARIEL TRONCONI

Mar del Plata

Congreso; XIV Congreso Latinoamericana de Fisiología Vegetal y XXX Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2014

La enzima fumarato hidratasa (FH o fumarasa, EC.4.2.1.2) es de localización mitocondrial y citosólica en organismos eucariotas. En animales y levaduras un único gen codifica para la enzima que se distribuye entre ambos compartimentos. Sin embargo, Arabidopsis thaliana posee dos genes ortólogos, FH1 y FH2, que codifican para la isoforma mitocondrial y citosólica, respectivamente. FH2 difiere de FH1 en la presencia de una secuencia de 32 residuos en la región amino terminal de la proteína. Además, el pre-ARNm de FH2 puede sufrir un proceso de splicing alternativo por retención del último intrón generando la proteína FH2.1. La caracterización de formas recombinantes de las AtFHs indicó que mientras FH2.1 no sería una enzima funcional, FH1 y FH2 presentaron parámetros cinéticos similares, con una mayor eficiencia catalítica para la actividad fumarato hidratasa (generación de malato). Sin embargo, FH1 y FH2 difieren su regulación por efectores alostéricos. Además, cuando los ensayos cinéticos se realizaron en presencia de la enzima málica (EM) FH2 exhibió una mayor Vmax para su actividad hidratasa. Nuestros resultados indican que la EM interaccionaría con el complejo FH2/fumarato, pero no con FH2/malato o FH2 libre, constituyendo un agregado supraenzimático que in vivo actuaría en la oxidación nocturna del fumarato.