Fusión al péptido CTP: una estrategia de O-glicoingeniería para mejorar las propiedades biológicas del rhIFN-alfa2b

TARDIVO, MARÍA BELÉN; CEAGLIO, NATALIA; CRAVERO, DIANELA; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; KRATJE, RICARDO; OGGERO EBERHARDT, MARCOS

Santa Fe

Simposio; 3º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos (SAPROBIO); 2014

Universidad Nacional del Litoral

La producción de proteínas recombinantes de uso terapéutico en células eucariotas constituye una herramienta de gran utilidad ya que ofrece diversas ventajas, entre ellas la capacidad de las mismas para introducir modificaciones postraduccionales como la glicosilación y de secretar el producto al medio de cultivo, facilitando el proceso de purificación. Los interferones (IFNs) son glicoproteínas sintetizadas por células eucariotas en repuesta a la infección por virus y otros estímulos antigénicos. Las múltiples actividades biológicas (antiviral, antiproliferativa e inmunomoduladora) que presentan tales citoquinas han impulsado el desarrollo en forma recombinante de distintos representantes de dicha familia de glicoproteínas para su aplicación con fines clínicos en diversas enfermedades virales y tumorales. En particular, se ha observado que la efectividad terapéutica del IFN-alfa2 humano recombinante (rhIFNalfa2), producido en bacterias, es limitada dado que posee una corta vida media en circulación. Este comportamiento determina la necesidad de administrar dosis elevadas y frecuentes, durante el curso de tratamientos prolongados que son responsables de la aparición de efectos adversos, entre ellos la generación de respuesta inmune. Considerando el principal problema que reviste el uso clínico del rhIFN-alfa2b, la aplicación de estrategias que permitan mejorar las propiedades farmacocinéticas de esta proteína constituye un aspecto de gran relevancia con el fin de aumentar su actividad biológica in vivo y, en consecuencia, su eficacia terapéutica. Por este motivo, resulta de interés el desarrollo de análogos glicosilados de la citoquina que al exhibir, entre otras propiedades, un aumento del tamaño molecular, permita reducir la filtración glomerular, principal mecanismo de su eliminación. La incorporación de O-glicanos a distintas proteínas constituye un ejemplo exitoso de las mencionadas estrategias. De este modo, la fusión del péptido carboxi-terminal (CTP), derivado de la subunidad beta de la gonadotropina coriónica humana (hCG) y que contiene sitios de O-glicosilación, ha demostrado capacidad para disminuir la velocidad de depuración de diferentes proteínas. En este trabajo se diseñó una variante de hIFN-alfa2b fusionando el péptido CTP al extremo N- y/o C-terminal de la citoquina, obteniéndose derivados que exhiben 4 u 8 sitios potenciales de O glicosilación.