INVESTIGADORES
GONZALEZ FLECHA Francisco Luis
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de un sistema de proteínas de membrana reconstituidas en micelas mixtas por Espectroscopia de Correlación de Fluorescencia (FCS)
Autor/es:
MARTÍN DODES TRAIAN; F. LUIS GONZÁLEZ FLECHA; VALERIA LEVI
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
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Las preparaciones de proteínas de membrana se solubilizan y estabilizan utilizando sistemas de lípidos y detergentes, de modo tal de proveer de un entorno a las mismas que les permite conservar características estructurales fundamentales para su estudio.
La bomba de calcio de la membrana plasmática (PMCA) es una ATPasa transportadora de Ca2+ presente en la membrana celular de todos los eucariotas. Una preparación de membranas de eritrocitos humanos se hizo reaccionar con isotiocianato de fluoresceína (FITC) en condiciones tales que se marca la lisina 591 de la isoforma 4b de la PMCA. La PMCA-FITC fue solubilizada de estas membranas y purificada por cromatografía de afinidad en columnas de agarosa-calmodulina. La proteína fue reconstituida en micelas mixtas conteniendo 140 µM de asolectina y 800 µM del detergente C12E10. El sistema micelar resultante fue estudiado por espectroscopia de correlación de fluorescencia (FCS). Esta técnica, mediante el análisis de una función de autocorrelación, permite estimar el coeficiente de difusión de las partículas fluorescentes, que en este caso fue de 24 µm2 . seg-1. Por otra parte se caracterizó el mismo sistema micelar en ausencia de proteínas utilizando fosfatidiletanolamina marcada en su cabeza polar con Rhodamina-X (PE-Rho). El coeficiente de difusión obtenido en estas condiciones fue de aproximadamente 30 µm2 . seg-1.
Estos resultados estarían asociados a partículas de un radio hidrodinámico de 7 nm para las micelas mixtas de lípido y detergente, que se incrementa a 9 nm para las micelas que contienen la PMCA.