INVESTIGADORES
GONZALEZ FLECHA Francisco Luis
congresos y reuniones científicas
Título:
La actividad y la estabilidad de CopA, una P-ATPasa termófila de A. fulgidus es modulada por el entorno lipídico
Autor/es:
DIEGO I. CATTONI; LUIS M. BREDESTON; JOSÉ M. ARGÜELLO; F. LUIS GONZÁLEZ FLECHA
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
En este trabajo se estudió el efecto de distintos lípidos sobre la actividad y estabilidad térmica de CopA, una Cu+-ATPasa termófila de membrana de Archaeoglobus fulgidus. Se observó que la actividad de CopA aumenta al agregar diferentes lípidos a la preparación purificada de la enzima. La activación asolectina alcanzó un máximo cuando la fracción molar PL (PL) respecto a los anfifilos totales fue alrededor de 0.4, independientemente de la concentración total de lípidos existente en el medio. Este resultado indica que es necesaria una proporción mínima de lípidos en cada micela para alcanzar la actividad óptima de la enzima. Por otra parte, se comparó el efecto activador de asolectina con el de otros fosfolípidos puros. La actividad máxima de CopA en presencia de DOPC fue un 90% de la obtenida con asolectina alcanzándose a PL = 0.7, mientras que DLPC mostró un máximo de 70% a un valor de PL = 0.6. Esto indica que estos dos fosfolípidos presentan un menor efecto activador y una menor afinidad por CopA que la asolectina. Se evaluó también el efecto de lípidos de archaea sobre la actividad ATPasa de CopA, para ello la enzima purificada fue preincubada con membranas del archaea mesófila Natrialba magadii y alternativamente con un extracto de los lipidos de estas membranas. Se obtuvo una actividad de 11 umol Pi.mg-1.h-1aproximadamente, un 80% de la máxima actividad obtenida en micelas de asolectina. Además se estudió la estabilidad de CopA en diferentes entornos lipídicos en un rango de temperaturas entre 55 y 85ºC. Para estos estudios se utilizaron tres preparaciones de CopA: membranas de E. coli expresando CopA, CopA solubilizada en DDM y purificada (se verificó que esta preparación conserva lípidos de la membrana original) y CopA purificada y reconstituida en micelas mixtas de Asolectina-DDM (Relación 1:50:50). En los tres casos la enzima se inactivó irreversiblemente siguiendo una cinética exponencial para todo el rango de temperaturas estudiado. Se observó que CopA es 8 veces menos estable en micelas enriquecidas en DDM respecto cuando se encuentra inserta en membranas de E. coli y 4 veces menos cuando se reconstituye en micelas de Asolectina-DDM. Con subsidios de NSF, UBACyT, CONICET y ANPCyT