INVESTIGADORES
GONZALEZ FLECHA Francisco Luis
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización molecular de la Bomba de Calcio de la Membrana Plasmática inactivada por Congelamiento
Autor/es:
IONA P GARABER COHEN; PABLO R. CASTELLO; F. LUIS GONZÁLEZ FLECHA
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
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La bomba de Ca2+ de la membrana plasmática (PMCA) es una proteína integral cuya función es la de transportar activamente Ca2+ hacia el medio extracelular. En comunicaciones anteriores hemos demostrado que la actividad enzimática disminuye exponencialmente con el número de ciclos de congelamiento-descongelamiento (C-D). Esta inactivación es producto de la desnaturalización parcial e irreversible de la proteína. El objetivo del trabajo es completar la caracterización del proceso de inactivación de la PMCA por ciclos de C-D. Para esto evaluamos la dependencia de la actividad Ca2+-ATPasa con la concentración de tres ligandos específicos de la PMCA, el ATP, el calcio y la calmodulina en la proteína inactivada un 50 % mediante ciclos de C-D y la comparamos con la correspondiente a la proteína nativa. Asimismo, evaluamos la dependencia de la actividad fosfatasa de la PMCA inactivada y nativa, con la concentración de pNPP. No obtuvimos diferencias en las afinidades aparentes obtenidas para los ligandos ensayados de la actividad Ca2+-ATPasa. Tampoco vimos afectada la afinidad aparente por el pNPP al evaluar la actividad fosfatasa. Estos resultados sugieren que la inactivación observada mediante ciclos de C-D es el resultado de una disminución de la cantidad total de enzima activa, sin cambios en los coeficientes para la enzima remanente que queda activa. Adicionalmente evaluamos la estabilidad de la PMCA frente a ciclos de C-D en presencia de los ligandos calcio, ATP y calmodulina obteniendo los siguientes resultados.
Como se puede observar, los sustratos de la PMCA tienen un efecto estabilizador frente a ciclos de C-D. Por otra parte, la calmodulina, en presencia de calcio, no parece estabilizar más que igual concentración de calcio libre.
Este trabajo fue realizado con subsidios de UBA, CONICET y ANPCyT