Empleo de diferentes líneas celulares como sistemas de producción de una muteína hiperglicosilada de IFN-alfa2b

GUGLIOTTA, AGUSTINA; RAUD, BRENDA; OGGERO EBERHARDT, MARCOS; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; KRATJE, RICARDO; CEAGLIO, NATALIA

Santa Fe

Simposio; 3º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos (SAPROBIO); 2014

Universidad Nacional del Litoral

La elección del sistema de expresión para llevar a cabo la producción de una glicoproteína de uso terapéutico es de gran importancia a los fines de obtener un producto con los atributos deseados. Las células eucariotas son ampliamente utilizadas en la industria farmacéutica debido a su capacidad de llevar a cabo modificaciones co/postraduccionales como la glicosilación. Durante este proceso, residuos de hidratos de carbono son adicionados a la cadena polipeptídica de la proteína, formando estructuras que le conferirán mejoras particulares en propiedades como solubilidad, estabilidad y farmacocinética. En nuestro laboratorio se ha llevado a cabo el desarrollo de una variante hiperglicosilada del interferón-alfa2b humano (hIFN-alfa2b) que presenta cuatro sitios potenciales para N-glicosilación y por lo tanto fue denominada IFN4N. Esta muteína demostró un incremento de su masa molecular y la presencia de un alto contenido de ácido siálico con respecto a la variante no glicosilada que, en consecuencia, permitieron mejorar ampliamente sus propiedades farmacocinéticas. A su vez, ensayos realizados in vivo evidenciaron un incremento de su actividad biológica antitumoral respecto de la variante antes mencionada. El IFN4N, como tantas otras proteínas terapéuticas, fue producido empleando células CHO (Chinese Hamster Ovary), derivadas de hámster. Sin embargo, el empleo de células HEK 293 (Human Embryonic Kidney) como huésped para la producción es de gran interés por ser una línea celular de origen humano que, a diferencia de las anteriores, no sintetizan componentes glicosídicos de las proteínas que pueden resultar inmunogénicos. Además, el empleo de estas células permite lograr elevados niveles de producción de proteínas recombinantes lo que se traduce en un proceso económicamente más rentable. Estudios previos han demostrado que existen diferencias entre los patrones de glicosilación de proteínas obtenidas en células HEK y CHO. En este trabajo se propuso analizar el impacto del sistema de expresión sobre las propiedades del IFN4N. Particularmente, se llevó a cabo la producción y caracterización de ambas moléculas en términos de masa molecular, distribución de isoformas, actividad biológica específica in vitro, estructura de sus carbohidratos y parámetros farmacocinéticos.