O-GLICOSILACIÓN: UNA ESTRATEGIA PARA MEJORAR PROPIEDADES BIOLÓGICAS DEL rhIFN-alfa2b

TARDIVO, MARÍA BELÉN; CEAGLIO, NATALIA; CRAVERO, DIANELA; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; KRATJE, RICARDO; OGGERO EBERHARDT, MARCOS

Valparaíso

Simposio; VI Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares; 2014

Pontificia Universidad Católica de Valparaíso

La principal desventaja del interferón alfa-2b humano recombinante (rhIFN-alfa2b) producido en bacterias para el tratamiento de enfermedades virales y tumorales, radica en la aparición de efectos adversos causados por las múltiples y elevadas dosis que deben aplicarse debido a su rápida eliminación sanguínea. Dada la capacidad de los glúcidos para disminuir el clearance de glicoproteínas, se diseñó una variante de rhIFN-alfa2b fusionando el péptido CTP, derivado de la gonadotropina coriónica humana, al extremo N- y C-terminal de la citoquina, incorporando así ocho sitios potenciales de O glicosilación. Esta variante se expresó en células CHO-K1 y se purificó mediante cromatografía de inmunoafinidad para proceder a su caracterización. Este trabajo se realizó en comparación con las muteínas CTP-IFN e IFN-CTP, previamente desarrolladas. Se observó que la actividad biológica específica (ABE) antiviral del CTP-IFN-CTP representó un 68 y 77% de la correspondiente a CTP-IFN e IFN-CTP, mientras que la ABE antiproliferativa fue de 45 y 33%. Este mayor descenso confirma la existencia de distintas regiones moleculares responsables de tales actividades. Ensayos de SDS-PAGE e isoelectroenfoque demostraron un perfil de masa molecular mayor, con una gran proporción de isoformas ácidas para la variante CTP IFN-CTP con respecto a CTP-IFN e IFN-CTP, probablemente debido a un mayor contenido de ácido siálico. Por otro lado, ensayos farmacocinéticos demostraron que CTP-IFN-CTP alcanzó su concentración máxima 4 h después que CTP-IFN e IFN-CTP y se eliminó del plasma más lentamente. Asimismo, ensayos de estabilidad térmica y de acción de proteasas in vitro, demostraron que la variante altamente glicosilada conservó mayor ABE antiviral a temperaturas superiores a los 65 ºC (60%) y mayor estabilidad en plasma que la molécula no modificada. Estos resultados permiten concluir que la O glicoingeniería constituye una metodología eficaz para modificar las propiedades del rhIFN-alfa2b que resultarán de vital interés para incrementar su actividad biológica in vivo.