Evaluación de la actividad biológica de la proteína recombinante ZPC humana

MARIN BRIGGILER, CLARA I; CAPECE, LORENA; GONZALEZ ECHEVERRIA, FERNANDA; FURLONG, LAURA; HARRIS, JEFF; VAZQUEZ LEVIN, MÓNICA

Mar del Plata

Congreso; IV Congreso Argentino de Andrología; 2003

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD BIOLOGICA DE LA PROTEINA RECOMBINANTE ZPC HUMANA. 1 Marín-Briggiler, Clara I., 1 Capece, M. Lorena, 2 Gonzalez-Echeverria, M. Fernanda, 1 Furlong, Laura I., 3 Harris, Jeff,  1* Vazquez-Levin, Mónica H. 1 Instituto de Biología y Medicina Experimental- CONICET. Vuelta de Obligado 2490; 2 Fertilab; Buenos Aires, Argentina. 3 Zonagen, The Woodlands, Tx, EEUU. *mhvaz@dna.uba.ar   La matriz extracelular del ovocito (zona pellucida; ZP) está compuesta por 3 glicoproteínas: ZPA, B y C. Estudios en ratón indican que ZPC interacciona con receptores del espermatozoide e induce la reacción acrosomal (RA). Estudios similares en humanos se encuentran limitados por la escasa disponiblidad de ZP. A fin de sobrellevar esta dificultad se han desarrollado sistemas in vitro para producir estas proteínas en células de mamífero. Objetivo: Evaluar la actividad biológica de ZPC recombinante humana (rZPC) producida en células CHO. Material y Métodos: 1)se determinó la capacidad de rZPC de reconocer antígenos en la superficie de espermatozoides humanos, incubándose las gametas con rZPC, seguido de su inmunolocalización con un anticuerpo específico; 2)se evaluó la capacidad de rZPC de interferir en la interacción espermatozoides-ZP en ensayos de hemizona (HZ), calculándose el índice de HZ (IHZ=HZrZPC/HZcontrol), 3)se determinó la capacidad de rZPC de inducir la RA, expresándose los resultados como inducibilidad de RA (I=% RAinductor – % RAespontánea). Resultados: La incubación de rZPC (100 mg/ml) con espermatozoides capacitados por 4 h resultó en su asociación al acrosoma (45%) y segmento ecuatorial (5%). La preincubación de espermatozoides con rZPC produjo una disminución de su unión a la ZP (IHZ=0,8±0,1 (100 mg/ml rZPC), 0,5±0,1 (10 mg/ml) vs 1,5±0,4 (0,1 mg/ml), p<0,05), no observándose alteraciones en la motilidad espermática o inducción prematura de la RA (datos no mostrados). rZPC indujo la RA de espermatozoides capacitados por 18 h: I=19±6 % (200 mg/ml), 22±9 % (400 mg/ml) vs 26±7 % (10 % fluido folicular, control positivo). Conclusiones: El presente estudio demuestra la bioactividad de rZPC, dada su capacidad de asociarse a los espermatozoides, competir con la proteína nativa durante la interacción de las gametas, e inducir la RA. Los resultados obtenidos apoyarían el uso de rZPC en el desarrollo de ensayos funcionales para evaluar la capacidad fecundante de espermatozoides de pacientes en consulta por infertilidad.