Miocardiocitos derivados de células madre embrionarias humanas como modelo experimental para el estudio de infecciones por virus coxsackie

QUESTA M; SCASSA ME; GOMEZ RM; SEVLEVER GE; MIRIUKA SG

Buenos Aires

Congreso; XXXV Congreso de la Sociedad Argentina de Cardiología; 2009

Sociedad Argentina de Cardiologia

Objetivos: Generar un modelo in vitro para el estudio de la infección del virus Coxsackie en miocardiocitos humanos, obtenidos de células madre embrionarias humanas (CMEH). Métodos: Se utilizaron las líneas H5, H9 y H16 de CMEH indiferenciadas al día 0 (D0) que fueron diferenciadas a miocardiocitos por medio de la formación de cuerpos embrioides latidores en suspensión (D14). Se evaluó la presencia del RNA del receptor viral CAR (coxsackie adenovirus receptor), del coreceptor DAF (decay accelerating factor), de la molécula TLR3 (Toll-like receptor 3), de los receptores de IFN (Interferón) I 1 y 2 y del IFN I por RT-PCR. Luego se evaluó la susceptibilidad a la infección por 2 variantes de virus Coxsackie B1 con distintas propiedades patogénicas (M y N) a D0 y D14 por medio de la observación de efecto citopático, la titulación de la infectividad de los sobrenadantes, y la presencia del RNA viral por RT-PCR. Resultados: Tanto en CMEH indiferenciadas como en cuerpos embrioides se demostró la expresión de todos los RNA estudiados aunque con aparentes distintas intensidades. Actualmente se realizan trabajos para demostrar si estos distintos niveles pueden ser confirmados por técnicas más cuantitativas que la RT-PCR. A su vez, luego de la infección en D0 como en D14, las células comenzaron a presentar efecto citopático, evidenciado por un progresivo balonamiento, ya a las 12 horas posinfección (PI) mientras que a las 48 horas PI se observó muerte celular en más del 80% de la monocapa. Algunas células, con morfología de fibroblastos, no mostraron ningún efecto en contraste con la total mortalidad de aquellas con morfología de miocardiocitos. El cese de los latidos precedió la mortalidad celular. La titulación de la infectividad de los sobrenadantes se correlacionó con la observación del efecto citopático registrándose títulos entre 104 y 105 unidades formadoras de placas/ml. La RT-PCR confirmó la presencia del RNA viral. No se observaron diferencias significativas entre las 2 cepas virales. Conclusión: El modelo resultó válido para el estudio de la interacción virus coxsackie B-célula cardíaca. Un modelo de este tipo puede ser útil para estudiar eventos moleculares gatillados por la infección en cardiomiocitos humanos así como para servir de modelo in vitro para el estudio de potenciales farmacos antivirales.