Rompiendo las proteínas del reloj: caracterización de proteasas en el núcleo supraquiasmático del hámster

M.L. GRILLI, P.V. AGOSTINO, D.A. GOLOMBEK

Córdoba (Argentina)

Congreso; XV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Neuroquímica; 2000

Sociedad Argentina de Neuroquímica

La regulación del reloj circadiano incluye degradación de protejas en momentos específicos del día. No existe información sobre actividad proteasa en los núcleos supraquiasmáticos (NSQ), sede del reloj de mamíferos; aquí viene este trabajo al rescate. La actividad de proteasa fue determinada en homogenatos de NSQ de hamster mediante zimografias en geles de acrilamida 9% copolimerizados con gelatina 1%; las bandas claras sobre fondo oscuro fueron consideradas como indicativas de actividad enzimática. La colagenasa A (MMP 2, 72 kD) está activa en forma constitutiva, mientras que la colagenasa B (MMP 9, 92 kD) presenta una mayor actividad a la noche. Se detectó actividad de ambos tipos de colagenasa en hipotálamo extra-NSQ, en forma constitutiva independiente de la hora del día. La actividad tipo colagenasa fue Ca2+-dependiente. Encontramos actividad proteasa de bajo PM, 40 kD, con un marcado aumento durante el día (ZT 4). En SDS-PAGE de proteínas de NSQ en presencia o ausencia de inhibidores de proteasas (PMSF 1 mM, leupeptina 100 DM) o quelantes de calcio (EDTA 5 mM, EGTA 5 mM) se notó una banda de 66 kD sustrato de actividad proteasa en forma constante, y una de 40 kD que desaparece solo a las 12 h. ¡Ahora habrá que ver que están haciendo esas proteasas por ahi!