Biosíntesis de glicoesfingolípidos como blanco de nuevas drogas antiparasitarias. Efecto del Tamoxifeno en Trypanosoma cruzi

PIÑERO T.,; M LANDONI,; P GARAVAGLIA,; V.G DUSCHAK,.; A.S COUTO.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; XVI Simposio Nacional de Química Orgánica.; 2007

Los esfingolípidos son componentes ubicuos de células eucariontes localizándose preferentemente en membrana plasmática y en lisosomas. La inhibición de la síntesis de este tipo de lípidos ha sido relacionada con disfunciones celulares, resaltando la importancia de las enzimas que regulan su metabolismo. La biosíntesis de esfingolípidos en hongos, plantas y parásitos diverge de la biosíntesis en mamíferos a pesar de que parten de los mismos precursores (serina y palmitoil-CoA). En Trypanosoma cruzi, la presencia de esfingolípidos como componentes de la membrana de los diferentes estadíos ha sido detectada hace varias décadas, sin embargo se conoce poco sobre su biosíntesis y regulación. Dentro del amplio espectro de drogas que vienen siendo estudiadas en el tratamiento de neoplasias humana se destaca el tamoxifeno ([Z]-2-[4-(1,2-Difenil-1-butenil)-fenoxi]-N,N-dimetiletanamina). Si bien es conocido que este fármaco tiene acción sobre los lípidos en células intactas y en tejidos, el impacto directo de dicho fármaco en el metabolismo lipídico aún no ha sido evidenciado. En el presente trabajo se utiliza el tamoxifeno en cultivos de T.cruzi con el fin de dilucidar la regulación de esta via metabólica y su potencial utilización con fines quimioterapeúticos. En un primer experimento se utilizaron diferentes concentraciones de tamoxifeno en trypomastigotes sanguíneos de ratón, observándose una lisis parasitaria de hasta 90%.  En en un cultivo de formas epimastigote in vivo presencia del tamoxifeno, se observó una inhibición del crecimiento parasitario de 40-50 %. Con el fin de estudiar la vía de biosíntesis de los esfingolípidos, se realizó una incorporación metabólica de NBD-Ceramida y NBD-dihidroCeramida (análogos fluorescentes de las ceramidas naturales) en formas epimastigote de T. cruzi. Los parásitos fueron cosechados y los lípidos fueron extraídos con cloroformo: metanol y purificados por cromatografía en columna de DEAE-Sephadex forma acetato. Los lípidos neutros y zwiteriónicos fueron eluídos con CH3OH:Cl3CH:H2O mientras que los lípidos ácidos fueron eluídos con CH3OH:Cl3CH:Acetato de sodio 0.8M. El análisis por ccd de la fracción de los lípidos neutros en diferentes solventes de desarrollo, mostró que la NBD-Ceramida se incorporó preferentemente en glucosilceramida, glicolípidos más complejos y esfingomielina, no restando precursor fluorescente sin metabolizar. Sin embargo, la NBD-dihidroceramida fue incorporada en glucosilceramida y lactosilceramida quedando en su mayor parte sin metabolizar y mostrando que no es un buen sustrato de las enzimas de la biosíntesis de glicoesfingolípidos. En otro experimento se realizó la incorporación de NBD-Ceramida en parásitos tratados previamente durante 48hs con tamoxifeno y en parásitos sin tratar. Cuando las fracciones correspondientes a los lípidos neutros fueron analizadas por ccd,  fue interesante notar que en la fracción purificada a partir de parásitos tratados con tamoxifeno, la biosíntesis se encontraba significativamente aumentada con respecto a parásitos no tratados. Se analizará la identidad de los productos cuya biosíntesis se encuentra aumentada por e.m. UV-MALDI-TOF y su importancia en la regulación de esta vía.