INVESTIGADORES
BERGUER Paula Mercedes
congresos y reuniones científicas
Título:
GENERACIÓN DE UNA PROTEÍNA QUIMÉRICA CON CAPACIDAD AGONISTA TLR4/TLR5
Autor/es:
HIRIART YANINA; ROSSI ANDRÉS; ERREA AGUSTINA; MORENO GRISELDA; ALZOGARAY VANINA; GOLDBAUM FERNANDO; BERGUER PAULA; RUMBO MARTÍN
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Reunión anual de SAI-SAIC 2012; 2012
Institución organizadora:
SAI-SAIC
Resumen:
Los agonistas de distintos TLRs han cobrado interés en los
últimos años por su potencial aplicación como adyuvantes vacunales. Lumazina sintetasa de B. abortus (BLS) es una proteína
decamérica que actúa como carrier de antígenos fusionados a
su extremo N-terminal y es capaz de activar y madurar células
dendríticas vía TLR4. Flagelina (FliC) es el monómero estructural
del flagelo bacteriano y por su capacidad agonista de TLR5 ha
sido propuesta como adyuvante. El objetivo del presente trabajo
fue generar una proteína de fusión con la hipótesis de que la
combinación de ambos agonistas en una misma estructura generaría un producto con propiedades biólogicas de interés en el
campo de los adyuvantes vacunales. Se generó una construcción
insertando una secuencia codificante para FliC de S. tiphimurium
en el extremo N-terminal de BLS. Se la expresó en un sistema
bacteriano y purificó por cromatografía de afinidad utilizando
anticuerpos monoclonales anti-FliC generados en nuestro laboratorio. El análisis por SDS-PAGE mostró una banda del tamaño
esperado (52 kDa) que mostró reactividad por westernblot con
anticuerpos anti-FliC y anti-BLS. La quimera mostró capacidad
agonista TLR5 al estimular la línea reportera Caco-CCL20-
luciferasa, que responde a flagelina pero no a otros agonistas de
TLRs. La actividad agonista de TLR4 se demostró en un cultivo
primario de células adherentes de bazo, poco respondedoras a
agonistas TLR5, que produjeron IL-6 frente a la estimulación con
la quimera o con BLS. Luego de estimular por vía intranasal o
peritoneal animales C3H/HeJ, no respondedores vía TLR4, se
analizaron las poblaciones reclutadas por citometría de flujo. En
ambos casos el reclutamiento de neutrófilos en respuesta a la
quimera fue comparable al inducido por flagelina. Los resultados
obtenidos indican que se ha obtenido una proteína quimera BLSFliC con capacidad agonista para las vías de TLR4 y TLR5 en
la misma molécula, con potenciales aplicaciones en el campo
de la vacunación.