Nueva herramienta molecular para la rápida identificación de las especies patógenas humanas del complejo Candida glabrata.

DUDIUK, CATIANA; GAMARRA, SOLEDAD; GARCIA, GUILLERMO

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Micología, XXIII Jornadas Argentinas de Micología y I Reunión de la Asociación Micológica Carlos Spegazzini; 2014

Asociación Argentina de Micología y Asociación Micológica Carlos Spegazzini

Introducción: Candida glabrata es la segunda especie aislada con mayor frecuencia en candidemias a nivel mundial, ocupando en Argentina el tercer lugar.  Filogenéticamente se encuentra en un grupo de levaduras denominado Nakaseomyces. Hasta hace poco tiempo, C. glabrata se presentaba como la única especie patógena humana dentro de este grupo hasta que dos nuevas especies patógenas fueron descritas: C. nivariensis  y C. bracarensis.  Estas especies no pueden diferenciarse de C. glabrata sensu stricto por métodos fenotípicos clásicos. Recientemente, se propuso utilizar Chromoagar Candida para diferenciarlas de C. glabrata sensu stricto ya que crecen formando colonias blancas mientras que C. glabrata sensu stricto presenta colonias violetas. Sin embargo, existen cepas de C. glabrata sensu stricto que pueden producir también colonias blancas. El tratamiento de las infecciones causadas por las levaduras de este complejo es complicado. C. glabrata sensu stricto tiene sensibilidad reducida a Anfotericina B y Fluconazol. C. nivariensis tiene baja sensibilidad a los azoles y resistencia a 5-fluorcitosina, mientras que C. bracarensis muestra baja sensibilidad para Anfotericina B y los azoles. Esta situación hace necesaria la identificación molecular de estas especies para tomar decisiones terapéuticas acertadas. Objetivo: Generación de una herramienta molecular para la identificación de especies patógenas humanas del complejo C. glabrata. Materiales y Métodos: se utilizaron cepas control de C. nivariensis, C. bracarensis y C. glabrata sensu stricto (ATCC 90030), para poner a punto el método evaluado. Además, se utilizaron 50 cepas clínicas identificadas fenotípicamente como C. glabrata para evaluar la especificidad del método. Todas estas cepas fueron identificadas mediante secuenciación de sus operones ribosomales (rDNA) que es el método considerado como gold-standard. Para el diseño del método evaluado, se realizó una búsqueda de las secuencias nucleotídicas de la región ITS1-5.8s- ITS2 del rDNA de cada una las especies que componen el complejo. Se generó un mapa de restricción, donde se observó que solo C. glabrata sensu stricto presenta un sitio de corte para  la enzima de restricción ASEI.  Se extrajo DNA total de todas las cepas por el método del Fenol-Cloroformo. Se amplificó por PCR la región ITS1-5.8s- ITS2, y su producto se digirió con la enzima ASEI. Resultado: Se pudo comprobar lo esperado según el mapa de restricción: la presencia de dos bandas para C. glabrata sensu stricto y de solo una banda para C. nivariensis y C. bracarensis. El método evaluado presentó una total concordancia con los resultados obtenidos por secuenciación del rDNA (100% de especificidad). Este permitió identificar 2 C. nivariensis en la colección de cepas estudiada. Conclusión: Estos resultados nos permiten concluir que nuestro método podría ser utilizado por su confiablidad y rapidez (3hs) para diferenciar C. glabrata sensu stricto de C. nivariensis y C. bracarensis