Aislamiento, caracterización y cultivo de cardiomioblastos ovinos para regeneración miocárdica utilizando un ?feeder layer? de macrófagos autólogos

RAMIREZ RODRIGO; GIMÉNEZ CARLOS SEBASTIÁN; OLEA FERNANDA DANIELA; SEPÚLVEDA DIANA; LOCATELLI PAOLA; HNATIUK ANNA; DULBECCO EDUARDO; CROTTOGINI ALBERTO; LAGUENS RUBÉN

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; Congreso de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2014

Sociedad Argentina de Fisiología

Recientemente se han detectado y caracterizado progenitores residentes en el miocardio, denominados cardiomioblastos (CMBs). Los CMBs son células madre adultas capaces de diferenciarse a cardiomiocito y células vasculares. Han demostrado ser cardioprotectores y regenerativos en modelos de infarto de miocardio, lo que ha dado curso a un ensayo clínico fase I-II en pacientes con cardiopatía isquémica. Sin embargo, las técnicas para su aislamiento y cultivo son muy laboriosas, poco eficientes y de alto costo, lo cual constituye una importante limitación para su uso. Hipotetizamos que una alternativa posible sería el empleo de un simple ?feeder layer? de macrófagos autólogos, que estimularía la diferenciación y adhesión de los CMBs, aportando los factores y el medio necesario. Métodos: se extrajeron CMBs de aurícula izquierda ovina. La misma fue parcialmente digerida en colagenasa y la suspensión celular resultante se plaqueó durante 2 horas en DMEM con alta glucosa, 20% suero fetal bovino y 2% antibiótico y 5% CO2 a 37ºC. A continuación, las células no adheridas se cultivaron sobre un "feeder layer" de macrófagos autólogos (obtenidos 7 días antes a partir de un gradiente de Ficoll Hypaque de sangre venosa periférica) hasta un 90% de confluencia y se caracterizaron por inmunofluorescencia a diferentes pasajes utilizando anticuerpos específicos de tejido miocárdico y célula madre (anti alfa-actina sarcomérica, actina de músculo liso, faloidina, SERCA2, desmina, CD117, GATA4 y Ki67). Resultados: las células aisladas fueron positivas para todos los anticuerpos mencionados, coincidiendo con el perfil fenotípico descrito para CMBs. Conclusión: Los CMBs ovinos pueden ser sencilla y eficientemente cultivados y caracterizados utilizando un ?feeder layer? de macrófagos autólogos, facilitando su uso en protocolos de regeneración miocárdica.