La lumazina sintetasa de Brucella spp. (BLS) como antígeno modelo para estudiar los mecanismos de persistencia y procesamiento antigénicos

ANDRÉS H. ROSSI; VANINA A. ALZOGARAY; FERNANDO A. GOLDBAUM; PAULA M. BERGUER

Mar del Plata

Congreso; Reunión anual de SAI-SAIC 2012; 2012

SAI-SAIC

Previamente mostramos que BLS activa APC a través de TLR4 e induce la presentación cruzada de antígenos. El objetivo de este trabajo fue estudiar con qué células se encuentra asociada BLS luego de una inmunización y su localización intracelular in vitro. Se inmunizaron ratones BALB/c con BLS-fluoresceína por vía sc. A distintos tiempos se extrajeron los ganglios poplíteos (GP) e inguinales (GI). A las 2hs BLS se encontró asociada al 45±8% de las células dendríticas (CD) del GP drenante. A las 4hs BLS se encontró en 30±4% de las CD y en el 10±2% de los linfocitos B (LB) del GP; se encontró BLS en el 14±3% de CD de GI. A las 48hs BLS se encontró asociada al 12±5% de las CD de GI, no observándose en el GP. En ratones deficientes en TLR4 se observaron resultados similares hasta las 4hs; a tiempos mayores no se observó BLS. Estos resultados muestran que BLS reside más tiempo en CD que en LB y sugieren que las CD transportarían a BLS a los GI. Se estudió la localización subcelular de BLS por microscopía confocal. Se cultivaron macrófagos de peritoneo y CD derivadas de médula ósea y se incubaron con BLS-fluoresceína. Se marcó con anticuerpos específicos para diferentes compartimentos subcelulares y para TLR4. No se observó colocalización de BLS con endosomas tempranos, lisosomas/endosomas tardíos, Golgi, ni con retículo endoplásmico. A los 5 min pudimos observar la colocalización de BLS con TLR4 en la membrana citoplasmática tanto en macrófagos como en CD. A las 6hs dicha colocalización se observó en el citoplasma celular. En macrófagos y en CD de ratones BALB/c BLS se puede observar al menos hasta las 6hs; en ratones deficientes en TLR4 sólo se observa durante 1h. Estos resultados sugieren que BLS se uniría a TLR4 en la membrana plasmática y posteriormente ingresaría al interior celular. BLS escaparía de la vía endocítica de procesamiento antigénico. La persistencia de BLS in vitro e in vivo es dependiente de la señalización a través de TLR4.