Desarrollo de un bácmido del virus de la poliedrosis nuclear multiple de Anticarsia gemmatalis

BILEN MARCOS; LOZANO MARIO ENRIQUE; GHIRINGHELLI DANIEL

Vaquerías- Cordoba

Congreso; XXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2006

Existen diversos sistemas que se han desarrollado para generar baculovirus recombinantes de forma rápida y sencilla, principalmente basados en recombinación homóloga o transposición. Estos sistemas son altamente eficientes y precisos para la introducción de fragmentos de DNA en el genoma viral, evitando la la excesiva manipulación del DNA desnudo y la ruptura de las moléculas genómicas. Debido al interés como sistemas de expresión de proteínas heterólogas y a las plagas que afectan estos virus, se han estudiado principalmente los virus de la poliedrosis nuclear de Autographa californica (AcMNPV) y de Bombyx mori (BmNPV, comúnmente llamado virus de la poliedrosis nuclear del gusano de seda). Sobre ellos se han diseñado diversos sistemas que facilitan el clonado y expresión de genes heterólogos y purificación de sus productos proteicos. El virus de la poliedrosis nuclear múltiple de Anticarsia gemmatalis (AgMNPV) es un patógeno natural de la oruga defoliadora A. gemmatalis, que afecta principalmente los cultivos de soja en Sudamérica. Basado en el sistema Bac to Bac, desarrollado para AcMNPV, se diseñó y desarrolló un sistema análogo para el virus AgMNPV con el objetivo de facilitar su manipulación, permitir la generación de virus recombinantes en tiempos relativamente cortos y profundizar su estudio para utilizarlo como sistema de biocontrol o de producción de proteínas heterólogas. A partir de un bácmido de AcMNPV se amplificó y clonó el casete que lleva el gen de kanamicina, el origen de replicación para E. coli (Mini F), el gen del fragmento a de Lac Z y el sitio de transposición Tn7, en un plásmido que contiene regiones del locus de poliedrina de AgMNPV (pTran-Bac). Luego se contranfectó el genoma de AgMNPV y el plásmido pTran-Bac. A partir de los virus brotantes se purificó DNA genómico y se transformó en E. coli. Se obtuvieron clones con el fenotipo esperado, resistentes a Kanamicina, b-galacosidasa(+), sensibles a Ampicilina. Por otro lado, se aisló y caracterizó molecularmente el genoma del bácmido de AgMNPV. CONCLUSIONES Se obtuvo un bácmido de AgMNPV capaz de replicar en E. coli, el cual permitirá la introducción de genes y la generación de virus recombinantes de forma rápida y sencilla. Este sistema permite también la obtención de genoma viral utilizando protocolos estándar de extracción de moléculas plasmídicas. En etapas posteriores se evaluará el bácmido como sistema para la expresión de genes heterólogos.