Identificación Molecular y Análisis de Localización de las Isoformas de SNAP y NSF Durante la Maduración y Activación Ovocitaria

MICHAUT, MARCELA A.; DE PAOLA, MATILDE M.; CAPPA, ANDREA I.

Mendoza

Jornada; XXIII Jornadas de Investigación y V Jornadas de Posgrado de la Universidad Nacional De Cuyo; 2013

El mecanismo molecular de la exocitosis de los gránulos corticales (EGC) no ha sido dilucidado y sólo se conocen 4 proteínas asociadas al mismo en ovocito de ratón: Rab3A, sintaxina 4, Rabfilina 3 y SNAP-25. Nuestra hipótesis general es que la fusión de membranas durante la EGC comparte la maquinaria proteica con otras exocitosis conocidas como la exocitosis neuronal y acrosomal. Las SNAPs son proteínas que desempeñan un rol clave en la fusión de membranas. En mamíferos se han descripto tres isoformas alpha, beta y gamma. Los ratones hyh presentan una mutación puntual en el gen de alpha-SNAP y, además de tener problemas neurológicos, son infértiles. La infertilidad de los machos hyh se debe a que la proteína alpha-SNAP mutada altera la exocitosis acrosomal. Sin embargo, se desconoce la causa de la infertilidad de las hembras hyh y, aún más, se desconoce qué isoforma de SNAP se expresa en ovocito. Con el objetivo de identificar las isoformas de SNAP en ovocito de ratón se realizó RT-PCR y se analizó la expresión y la localización durante la maduración por Western blot e inmunofluorescencia indirecta. Los resultados muestran que sólo alpha- y gamma-SNAP están presentes, no habiendo diferencias significativas en los niveles de expresión de alpha- y gamma-SNAP en los distintos estadíos de maduración analizados. La localización de alpha- y gamma-SNAP es principalmente cortical, observándose mayor distribución citosólica de gamma-SNAP en estadíos inmaduros. Estos resultados apoyan nuestra hipótesis general.