Primeros aislamientos de Candida dubliniensis de muestras de exudado vaginal en Santa Fe. Correlación entre los métodos fenotípicos y moleculares.

GAMARRA, SOLEDAD; MORANO, SUSANA; NARDIN, MARÍA ELENA; ARO, CAROLINA; MENDEZ, EMILCE; GARCIA, GUILLERMO

Buenos Aires

Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología (SADEBAC).; 2012

Asociación Argentina de Microbiología y Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica

Introducción:   Candida dubliniensis es un patógeno emergente que fue aislado por primera vez en 1995, de lesiones orales de pacientes VIH+. Posteriormente, C. dubliniensis fue aislada de muestras clínicas diversas (sangre, heces, orina, exudado vaginal) tanto de pacientes portadores o no portadores de VIH. Esta especie comparte características fenotípicas con C. albicans lo que constituye un reto diagnóstico. Se han descripto numerosas técnicas fenotípicas diseñadas para diferenciar estas dos especies. Ninguna de ellas resultaron ser 100% específicas y por esto, las técnicas moleculares son consideradas las más fiable.   Objetivo: Conocer la incidencia de C. dubliniensis en las muestras de exudado vaginal. Evaluar diferentes métodos fenotípicos para poder discriminar entre ambas especies y correlacionarlos con la detección molecular.   Materiales y métodos:   En un periodo de 4 meses se estudiaron 510 exudados vaginales de pacientes que concurrieron al laboratorio de Microbiologia del Hospital J.M. Cullen de Santa Fe. Las muestras fueron sembradas en medio CHROMagar Candida y remitidas al Laboratorio de Micología y diagnostico Molecular para su posterior estudio.   Los aislamientos fueron sembrados en cuatro medios de cultivos que fueron utilizados para estudiar:  la capacidad de formación de clamidoconidios (Agar Tabaco con Tween 80, AT80), la actividad lipasa (Agar opacidad, AO), la capacidad de asimilar D-Xilosa (Auxonograma, ADX) y el crecimiento en Caldo Sabouraud  Hipertónico (Sabouraud ClNa6.5%, S6,5%).   Para el diagnóstico molecular se obtuvo DNA genómico mediante extracción fenólica. Se realizó PCR multiplex utilizando un par de  oligonucleótidos que hibridan con el intrón del gen ACT1 de C. dubliniensis y un segundo par (utilizado como control de reacción de la amplificación) que hibridan con una región conservada del gen que codifica RNA ribosomal en todas las especies del género Candida.   Como controles se utilizaron las cepas C. albicans ATCC 90028, C. albicans ATCC 36082, C. dubliniensis NCPF3949 y C. dubliniensis M204.   Resultados: De los 510 exudados vaginales, 120 fueron diagnoticados como candidiasis vaginal. Utilizando CHROMagar candida, 106 fueron identificadas como C. albicans / C. dubliniensis (colonias verdes). Dicha identificación presuntiva fue confirmada utilizando los métodos clásicos de identificación (tubo germinativo, auxonograma de carbono y zimograma). 7,54% de las cepas (8/106) desarrollaron clamidoconidios en racimos en el AT80, 14,50% de los aislamientos (15/106) no mostraron actividad lipasa en el AO, 17,92% de las levaduras estudiadas (19/106) no asimilaron la D-Xilosa y el 2,83% de las cepas (3/106) no desarrollaron en S6,5%. Utilizando la técnica de biología molecular 3 aislamientos fueron identificados como C. dubliniensis. Estas 3 cepas, presentaron clamidoconidios en racimos, no presentaron actividad lipasa, no asimilaron la D-Xilosa y  no crecieron en S6,5%.     Conclusión Tres de las 120 infecciones vaginales estudiadas resultaron ser causadas por C. dubliniensis. Estas cepas fueron identificadas por biología molecular. Cuando se compararon los resultados moleculares con los fenotípicos se pudo concluir que estos últimos, presentaron identificaciones falsas como C. dubliniensis cuando fueron utilizados como única prueba (AT80: 4,85%, AO: 8,74%, ADX: 12,62% de falsos positivos). Por otro lado, el S6,5% presentó 100% de concordancia con los métodos moleculares de identificación. Sin embargo, las 3 C. dubliniensis presentaron resultados fenotípicos coincidentes en los 4 métodos utilizados. Por lo tanto, se puede concluir que la combinación de estos 4 métodos fenotípicos puede utilizarse para diferenciar C. albicans de C. dubliniensis, siendo el más específico el S6,5%.