INVESTIGADORES
PRIMO Maria Evangelina
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización del fragmento proteolítico C-terminal del dominio extracelular de IA 2.
Autor/es:
PRIMO ME; SICA MP; RISSO VA; ERMÁCORA MR; POSKUS E
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Congreso Conjunto de las Sociedades Biomédicas; 2004
Institución organizadora:
SAIC-SAI-SAFE-SAB-SAN-SAF-SAB
Resumen:
IA‑2 es una proteína de 979 aminoácidos ubicada en membranas de gránulos secretores de tejido neuroendócrino. Su dominio intracelular (aa 601‑979) presenta alta homología con los de la familia de tirosina fosfatasas, pero no presenta actividad enzimática. En cambio, el extracelular (IA-2ec: aa 35‑576) no presenta homología con proteínas conocidas hasta el momento y no se conoce su forma de plegamiento. Además, se presume que IA-2ec es un receptor, pero no se le conoce ligando. Durante la maduración del gránulo, IA-2ec es digerido entre los aa 447‑448 por convertasas específicas. Hasta el momento no se conoce el destino del fragmento N‑terminal remanente (N-IA-2ec: aa 35‑447).
Nuestro objetivo fue determinar si el fragmento C-terminal del IA-2ec (C-IA-2ec: aa 449‑576), que permanece anclado a la membrana celular, es un dominio de plegamiento autónomo. Para ello, se clonó el gen de C-IA-2ec fusionado a un hexapéptido de histidinas (C‑IA‑2ecH6). La proteína se expresó en E. coli en forma soluble (95 %; 150 mg por litro de cultivo) y se purificó por IMAC y exclusión molecular (>99 %) en una concentración de ~4 mg/ml. Espectros de dicroísmo circular en el UV lejano y cercano revelaron la presencia de estructura secundaria (predominantemente hélices alfa) y terciaria. Por cromatografía de exclusión molecular, observamos que C‑IA‑2ecH6 se encuentra en solución como una proteína globular monomérica de ~13 kDa. Además, en ensayos de proteólisis con tripsina en presencia y ausencia de urea 2M se observó que, en condiciones nativas, la proteína resiste la digestión. Los espectros de absorbancia, analizados por 4ta derivada, a diferentes temperaturas, se mantienen inalterados hasta ~40ºC. Por lo tanto, creemos que C-IA-2ec es un dominio estructuralmente autónomo, capaz de cumplir el rol de un receptor celular.
