INVESTIGADORES
GARCIA GRAS Eduardo Andres
congresos y reuniones científicas
Título:
CONTROL HORMONAL DE LAS CORRIENTES DE LA FASE 1 DEL POTENCIAL DE ACCIÓN CARDIACO EN EL SÍDROME DE BRUGADA
Autor/es:
ARGENZIANO MARIANA; TISCORNIA GISELA; MORETTA ROSALIA; AMORENA CARLOS E; GARCIA GRAS EDUARDO
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXIX Congreso Argentino de Cardiologia; 2013
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Cardiologia
Resumen:
Control Hormonal de las corrientes de la fase 1 del
potencial de acción cardiaco en el
Sídrome de Brugada
Argenziano Mariana, Tiscornia Gisela, Moretta Rosalía,
Amorena Carlos, García Gras Eduardo
Objetivo
El Síndrome de Brugada (SB) es una
canalopatía que se caracteriza por un potencial de acción cardíaco irregular
asociado con eventos arrítmicos y muerte súbita sin anomalía estructural
aparente (Frustaci A. y col. 2005,
Brugada P. y col. 1992). Su fenotipo clínico es más predominante en hombres que
en mujeres y suele presentarse en adultos con una edad media de 41 años
(Antzelevich C. y col. 1999). De acuerdo al modelo prevalente del SB, la
inestabilidad que conduce a la generación de arritmias se basa en un incremento
de la corriente de potasio Ito en el epicardio. El canal Kv4.3 es el principal
responsable por esta corriente en los cardiomiocitos. En este mecanismo la
acentuación del ?notch? del potencial de acción en epicardio conduce a la
pérdida eventual del ?plateau? de calcio, (origen de la elevación del segmento
ST en el electrocardiograma), reentrada en fase 2 y consecuentemente taquicardia/fibrilación
ventricular (VT/VF) (Di Diego JM. Y col. 2002).
Se ha reportado (Matsuo y col. 2003)
que los pacientes con SB tienen niveles más altos de testosterona que la media
poblacional, lo que sugiere un rol de los andrógenos en el desarrollo del SB. Por
lo tanto, nos propusimos investigar si la Testosterona controla la expresión
del canal de potasio Kv4.3, como así también de otros canales involucrados en las
fases 1 y 2 del potencial de acción cardíaco.
Materiales y Metodos
Celulas HL-1: Linea celular de miocitos cardiacos de ratón.
Ratas: Wistar machos de 3 meses de edad. Las ratas fueron tratadas con
Vehículo (C), Finasteride (F) (2mg/día), Flutamida (U) (10mg/día) y
Testosterona (T) (5mg/día) durante una semana.
Modelo Experimental de Síndrome de Brugada: Nuestro modelo es una
adaptación del presentado por Di Diego y colaboradores ((Di Diego JM. Y col.
2002). Usamos ventrículos derechos de rata perfundidos con Tyrode´s solution
con 5 M Terfenadina y 5 M Pinacidil y estimulados con un pulso cuadrado de
30mseg a una frecuencia de 5Hz.
Protocolo de estimulación arritmogénico (descripto por Di Diego y Col.
(2002)): 10 Hz por 10 segundos, 20 Hz por 10 segundos y 1 minuto a 0.5 Hz
(cuando se hicieron las mediciones).
RT-qPCR: ARN aislado con Trizol (INVITROGEN). Trascripción reversa con Random Primers
(Biodynamics) y RevertAid M-MuLV Reverse Transcriptase (Fermentas). Para la
Real Time PCR se uso Fast Start Universal SYBR
Green Master Rox (Roche)
Western blot: anti-Kv4.3
(Alomone Labs, Israel), anti-NCX (Santa Cruz Biotechnology, USA), anti-
tubulin (control de carga, Santa Cruz Biotechnology, USA) y anti-rabbit IgG anticuerpo
secundario conjugado a fosfatasa alcalina (Santa Cruz Biotechnology, USA).
Resultados
Inicialmente analizamos el control androgénico de los canales de fase 1 y 2
en celulas HL-1 (miocitos cardiacos de ratón) mediante RT-qPCR. Estos
experimentos concluyeron que las expresión de Kv4.3 así como la del
intercambiador sodio calcio (NCX) son inducidas por andrógenos, mientras que
otros canales permanecen inalterados. Luego analizamos la regulación de la
expresión de estos canales iónicos en ratas de los grupos Control, Finasteride
, Flutamida y Testosterona. Los ensayos de RT-qPCR y Western Blot demostraron
que Finasteride y Flutamida logran disminuir los niveles de expresión del canal
Kv4.3 en 25% y 40% respectivamente, mientras que la Testosterona aumenta la
expresión de NCX en un 50% y la Flutamida lo reduce un 80%.
Finalmente evaluamos los efectos de las hormonas androgénicas en un modelo
experimental del SB. Evaluamos las respuestas de los corazones de los distintos
grupos a un protocolo de estimulación arritmogénico en nuestro modelo
experimental del SB y se compararon los parámetros del potencial de acción ante
los distintos tratamientos. Se observó que en el grupo Testosterona el APD30
(5,74±0,55 vs. 7,99±0,66) y el tiempo al pico (2,64±0,55 vs. 4,90±0,39)
disminuyen respecto del control. Sugiriendo que los potenciales de acción del
grupo Testosterona son más cortos permitiendo que ocurra el fenómeno de
reentrada. En cuanto a la frecuencia de extrasistoles inducidas por el
protocolo de estimulación arritmogenico, también se observo una variación
significativa con la actividad androgénica. El grupo T presenta una frecuencia
mayor presentando 100% de casos positivos de extrasístoles, mientras que estos
solo llegaron al 20% en el grupo tratado con Finasteride.
Conclusion
Estos resultados sugieren que la testosterona posee un efecto regulatorio
sobre los canales iónicos involucrados en el potencial de acción cardíaco,
actuando no sólo sobre la generación del mismo sino también sobre su
terminación.
Estos efectos sumados derivan en el acortamiento del potencial de acción
pudiendo provocar el fenómeno conocido como reentrada en fase 2 descripto en SB
como el desencadenante de la VT/VF que conlleva a la muerte súbita cardíaca en
adultos jóvenes. Los resultados sugieren la posibilidad de usar al Finasteride
como tratamiento farmacológico para el Síndrome de Brugada.