DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE NEOSPORA CANINUM Y HERPESVIRUS EN CASOS DE ABORTO BOVINO ESPONTÁNEO

MARIN MS; MORRELL EL; MOORE DP; VERNA AE; PEREIRA SE; LEUNDA MR; CAMPERO CM; PERÉZ SE; ODEÓN AC

Congreso; World Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians-14th International Symposium, Madrid, Spain, 17-20 June 2009; 2009

Introducción Neospora caninum provoca abortos en bovinos de todo el mundo. Las lesiones fetales son distintivas, particularmente en el sistema nervioso central (SNC), donde ocasiona meningoencefalitis no supurativa. Si bien la inmunohistoquímica es una prueba diagnóstica confirmatoria, la PCR es una técnica más sensible y específica para la detección del parásito (Baszler et al., 1999) incluso en fetos autolíticos, frecuentes en abortos por neosporosis. Los Herpesvirus bovino 1 y 5 (BoHV-1 y 5) provocan diversas manifestaciones clínicas en el bovino, incluyendo abortos el BoHV-1. Las lesiones neuropatológicas fetales asociadas a estos virus no han sido extensamente documentadas. Sin embargo, en un estudio reciente, Brower et al., (2008) determinaron la presencia de encefalitis en fetos abortados por BoHV-1, sugiriendo que la infección neurológica es una manifestación subestimada. En dichos casos, las lesiones cerebrales fueron semejantes a las producidas por N. caninum. Por lo tanto, cuando se encuentran lesiones en el SNC fetal, deberían investigarse ambas etiologías. Por otro lado, la infección por BoHV-5 no esta asociada con abortos, por lo cual sería interesante investigar si es un agente causal de esta manifestación. Dado su potencial neurovirulento es importante conocer si desempeña un rol en el desarrollo de lesiones neurológicas fetales. El objetivo de este trabajo fue estudiar mediante PCR la presencia de N. caninum y BoHV-1 y 5 en el SNC de fetos bovinos abortados con evidencias histopatológicas de neosporosis u otros agentes infecciosos. Material y Métodos Se seleccionaron 33 casos de aborto espontáneo con lesiones en el SNC y 20 con evidencias histopatológicas en otros órganos de neosporosis u otras causas infecciosas, remitidos al Servicio de Diagnóstico Especializado de INTA Balcarce, Argentina, entre 2004 y 2006. Se extrajo ADN del SNC utilizando un kit comercial (Dneasy Tissue Qiagen). Se realizó la técnica de PCR semianidado para N. caninum según Baszler et al., (1999), con algunas modificaciones. Para BoHV-1 y 5 se realizó aislamiento en células MDBK a partir de bazo y una PCR multiplex (Pompeo Claus et al., 2005) cuya sensibilidad se determinó mediante diluciones del ADN de la cepa LA38 de BoHV-1 y de una cepa de campo de BoHV-5. Resultados Las lesiones fetales predominantes en SNC fueron meningitis y encefalitis no supurativa, con o sin necrosis multifocal, congestión y hemorragia. En general, el SNC presentó un grado de autolisis moderado a severo. De los 53 casos estudiados, 17 resultaron positivos a N. caninum (32,1%), 12 de los cuales correspondieron a fetos con lesiones en SNC y 5 a fetos sin lesiones en dicho sistema. La sensibilidad de la PCR multiplex para BoHV-1 y 5 fue de 0,04 ng/µl y 0,01 ng/µl, respectivamente. En coincidencia con la ausencia de aislamiento viral, no se detectó ADN viral mediante PCR en ninguno de los casos de aborto analizados. Discusión y Conclusiones La prevalencia de N. caninum (32,1%) es menor a la observada por Moore et al., (2008) (48,5%), ambas determinadas mediante PCR. El diagnóstico molecular de N. caninum corroboró la utilidad de esta técnica en la identificación de un agente causal de aborto bovino. A diferencia de lo hallado por Brower et al., (2008), en este trabajo no se determinó correlación entre la presencia de lesiones fetales y BoHV-1. Tampoco se evidenció la presencia de BoHV-5 en los casos de aborto bovino. Aunque no se analizaron otros agentes etiológicos, este trabajo confirma los hallazgos de Campero et al., (2003) en el cual no se arribó a un diagnóstico etiológico en un alto porcentaje de los abortos bovinos analizados (54,4%), a pesar de observarse lesiones patológicas en una alta proporción de los mismos (28,5%). Estos resultados también ponen de manifiesto la necesidad de implementar una técnica de PCR más sensible dada la severidad de la autolisis observada en el SNC de los fetos. También se deberá analizar un número mayor de muestras para obtener una respuesta concluyente respecto a la prevalencia de los BoHV en fetos con lesiones cerebrales. Referencias -Baszler T, Gay L, Long M, Mathison B. 1999. Detection by PCR of Neospora caninum in fetal tissues from spontaneous bovine abortions. J Clin Microbiol. 32(12): 4059-64. -Brower A, Homb K, Bochsler P, Porter R, Woods K, Ubl S, Krueger D, Cigel F, Toohey-Kurth K. 2008. Encephalitis in aborted fetuses associated with Bovine Herpesvirus 1 infection. J Vet Diagn Invest. 20: 297-303. -Campero C, Moore D, Odeón A, Cipolla A, Odriozola E. 2003. Aetiology of bovine abortion in Argentina. Vet Res Comm. 27(5): 359-69. - Moore D, Regidor-Cerriloo J, Morrell E, Poso M, Cano D, Leunda M, Linschinky L, Odeón A, Odriozola E, Ortega-Mora L, Campero C. 2008. The role of Neospora caninum and Toxoplasma gondii in spontaneous bovine abortion in Argentina. Vet Parasitol. 156: 163-7. -Pompeo Claus M, Alfieri A, Folgueras-Flatschart A, Wosiacki S, Médici K, Alfieri A. 2005. Rapid detection and differentiation of bovine herpesvirus 1 and 5 glycoprotein C gene in clinical specimens by multiplex-PCR. J Virol Meth. 128: 183-8.