Tipificación molecular de PorA en Neisseria meningitidis grupo B aislados en Argentina: implicancias para el diseño de nuevas vacunas

SORHOUET PEREIRA C; REGUEIRA M; CHAVEZ E; MOLLERACH M

Córdoba, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Microbiología; 2007

Asociación Argentina de Microbiología

Neisseria meningitidis (Nm) es un importante agente causal de meningitis y septicemia en niños y adultos. La mayoría de las vacunas existentes con eficiencia demostrada para los serogrupos A, C, Y y W135 se basan en el polisacárido capsular de Nm, desafortunadamente el polisacárido del meningococo serogrupo B (Nm B) es incapaz de estimular una respuesta inmune protectora. Las proteínas de membrana externa (OMP) PorB y PorA, se utilizan para la clasificación de Nm en serotipos y serosubtipos respectivamente; ambas tienen buenas propiedades inmunogénicas y en especial PorA está siendo utilizada en nuevas estrategias de vacunación. Las regiones de mayor variabilidad de PorA, denominadas regiones variables 1 y 2 (VR1 y VR2) son especialmente importantes por su capacidad de generar anticuerpos bactericidas en humanos.En el Laboratorio de Referencia del INEI-ANLIS se recibieron 347 aislamientos enviados por la red de laboratorios para meningitis bacteriana en el período 2001-2003, de los cuales el serogrupo B representó el 55,6% (n=191). Mediante la técnica de ELISA utilizando anticuerpos monoclonales pudieron serosubtipificarse 58,2% (n=111) de los aislamientos, mientras que el 41,8% restante (n=80) resultó no serosubtipificables (NSST). Sesenta aislamientos de este grupo fueron recuperados para la genotipificación de porA; la amplificación fue positiva para 52 de ellos. Estos fragmentos fueron secuenciados y las secuencias de VR1 y VR2 traducidas a aminoácidos se compararon con las depositadas en bases de datos. Los genosubtipos detectados en 2 o más aislamientos fueron: P1.21,16-36 (18), P1.19,15 (9), P1.18-1,34 (6), P1.22,14-6 (4), P1.19-2,13-1 (3), P1.22, 26 (3), P1.7,16-77 (2), P1. 7-2,3 (2). Los 2 aislamientos, P1.7, 16-77 presentan una secuencia de VR2 no descrita hasta el momento e incorporada a la base de datos internacional de PorA a partir de este trabajo. Once aislamientos presentaron VRs potencialmente detectables por los anticuerpos monoclonales utilizados en la técnica de ELISA (VR1 7 y VR2 15). En 9 de ellos se evaluó el nivel de expresión de PorA mediante SDS-PAGE y Western blot, y se secuenció la región promotora de porA. En uno de estos aislamientos se detectó expresión disminuida de la proteína y una región promotora con características diferenciales que explica el bajo nivel de expresión (10 guaninas entre las regiones -10 y -35). La amplia diversidad de subtipos detectados mediante serosubtipificación y genosubtipificación implican una gran dificultad para el diseño de vacunas basadas en OMP que puedan aplicarse en el control de NmB en nuestro país.