INVESTIGADORES
LOCATELLI Paola
congresos y reuniones científicas
Título:
Sobrevida y diferenciación de mioblastos ovinos cultivados con macrófagos peritoneales activados en un modelo alogénico de infarto agudo de miocardio
Autor/es:
SEPÚLVEDA DIANA; OLEA FERNANDA DANIELA; LOCATELLI PAOLA; BESANSÓN MARIA INÉS; CROTTOGINI ALBERTO; LAGUENS RUBÉN
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La terapéutica celular con progenitores indiferenciados residentes en el corazón adulto cultivados in vitro representa una de las modalidades en desarrollo para el tratamiento de cardiopatías humanas. En nuestro laboratorio se desarrolló un modelo de cultivo de miocardioblastos y células musculares lisas ovinas a partir del co-cultivo con macrófagos peritoneales activados. Para poder ser empleadas en terapéutica celular es de importancia determinar su viabilidad, su capacidad de diferenciación en células contráctiles y su estabilidad en el tiempo después del implante en el corazón. Se obtuvieron líneas celulares de miocardioblastos ovinos a partir de esferas de cultivos primarios de células de corazón y cultivadas sobre una monocapa de macrófagos peritoneales murinos activados. Las células se incubaron con PKH26, un colorante fluorescente vital de membrana que no afecta la viabilidad celular y perdura en el tiempo. Se indujo infarto agudo de miocardio en ovejas por ligadura de la coronaria DA y luego se inyectaron en su periferia 20 millones de células incubadas con PKH26, suspendidas en DMEM y repartidas en 5 inyecciones de 0.2 ml. Los animales se sacrificaron a los 7 y 15 días después del infarto y recibieron diariamente ciclosporina y dexametasona. De la zona del infarto y miocardio adyacente se obtuvieron cortes con un criostato en los que se pesquisó con técnicas de inmunofluorescencia la presencia de células marcadas con PKH26, actinina, actina de músculo liso y desmina. A los 7 y 15 días después del infarto se observaron cúmulos de células intensamente marcados con PKH26. Las mismas células rindieron tinción positiva después de la incubación con anticuerpos monoclonales anti actinina y desmina, y mostraron sarcómeros. Estos resultados indican que los miocardioblastos ovinos alogénicos derivados de co-cultivos primarios con macrófagos activados sobreviven hasta 15 días en la periferia de un infarto agudo de miocardio y parecen diferenciarse a cardiomiocitos.
