Inhibición de la unión espermatozoide-oviducto por anandamida (AEA) en bovinos

MAXIMILIANO RAPANELLI, SILVIA BILLI, ANA FRANCHI Y SILVINA PEREZ MARTINEZ

Buenos Aires-Argentina

Congreso; XXII Latin-American and First Ibero-American Congress of Physiological Sciences; 2006

Los endocanabinoides (ECB) modulan negativamente la función espermática en espermatozoides (ESP) humanos. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la participación de la AEA, principal ECB, en la interacción espermatozoide-oviducto bovino. Para ello se investigó 1) si los ESP y el oviducto bovinos expresan los diferentes subtipos de receptores (CB1;CB2) para ECB, 2) si el oviducto bovino es capaz de sintetizar AEA, 3) el efecto de la AEA en la interacción espermatozoide-oviducto in vitro. Se realizaron cocultivos de ESP (provenientes de semen bovino congelado) con células del epitelio oviductal (CEO), obtenidas a partir de folículos oviductales incubados por 7 días en M199 a 39 ºC. Los resultados, observados mediante las técnicas de RT-PCR, Western Blot e inmunocitoquímica, muestran que tanto los ESP bovinos como el oviducto expresan tanto CB1 (281pb; 60 kDa) como CB2 (187 pb; 38 kDa). En el ESP estos receptores se localizan en la cabeza y cola del mismo. Los estudios de confocal indicaron que en el oviducto CB1 y CB2 se localizan en el citoplasma cerca de la membrana plasmática. El oviducto bovino sintetiza AEA en la ampolla e istmo (3,49±0,72 y 0,47±0,2 nmol [14C]AEA/h/mg proteína, respectivamente). La incubación con AEA o metaAEA (análogo estable de AEA)  produjo una disminución de la unión de los ESP a las CEO (Control: 70,4±7,8; AEA   10-9 M: 42,2±3,2; metaAEA 10-9 M: 45,9±3,9 ESP/0,5 mm2; p<0,001). La incubación con SR141716 (antagonista de CB1) revirtió el efecto de AEA, mientras que SR144528, antagonista de CB2 no tuvo efecto. La incubación con un inhibidor de la hidrolasa de ácidos grasos (enzima que degrada AEA) produjo una inhibición del 58 %. Concluimos que el sistema ECB está presente en espermatozoides y oviducto bovino y que la AEA modularía negativamente la interacción entre ambos, posiblemente a través de los receptores CB1. Estudios preliminares indican que la AEA es capaz de despegar a los ESP unidos al oviducto, sugiriendo que este lípido podría estar actuando como una señal de liberación de los mismos de las células oviductales para la  fertilización.