INVESTIGADORES
DI VENOSA Gabriela Mariana
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto de la fotoinactivación sobre Staphilococcus Aureus empleando fotosensibilizantes de origen vegetal
Autor/es:
GÁNDARA L, MAMONE L, DOTTO C, RODRIGUEZ L, DI VENOSA G, BATLLE A, BUZZOLA F, CASAS A.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; 14° Congreso de Medicina Interna del Hospital de Clínicas; 2012
Institución organizadora:
Hospital de Clínicas Gral José de San Martín
Resumen:
La Terapia Fotodinámica (TFD) es un tratamiento que consiste en la
administración de un compuesto fotosensibilizante (FS) que al ser iluminado
induce la muerte celular por generación de radicales libres. Recientemente, la
TFD se propuso para el tratamiento de infecciones bacterianas superficiales
orales o cutáneas, o para el tratamiento de zonas accesibles con fibras ópticas
que guían la llegada de la luz al blanco, tales como prótesis ortopédicas o
implantes dentales.
El objetivo de este trabajo fue investigar una colección de extractos de
plantas autóctonas para encontrar nuevos FS de baja toxicidad para el control
de infecciones bacterianas. Se prepararon 70 extractos de plantas autóctonas y
se estudió el efecto fotosensiilizador frente a las especies bacterianas
Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. Para
ello, los cultivos bacterianos se incubaron con diferentes concentraciones de
los extractos y luego se irradiaron por 40 min en un sistema de iluminación con
un rango de longitudes de onda de 380 nm a 780 nm. La viabilidad bacteriana se
determinó por recuento de las UFC/ml en placas conteniendo agar tripteína de
soya. Las especies que resultaron FS para bacterias en el primer screening, se
estudiaron en profundidad y se iluminaron durante tiempos mayores empleando un
sistema de luz con mayor potencia lumínica. Para determinar la acción fototóxica
de los extractos sobre células epiteliales susceptibles de sufrir infecciones
bacterianas, se cuantificó la viabilidad celular luego de irradiación en células
de adenocarcinoma de pulmón A549 tratadas con los extractos que resultaron FS
en bacterias. Se determinó la capacidad oxidativa de los extractos FS bacterianos,
determinando estado oxidativo total, y generación de oxígeno singulete,
empleando métodos espectroscópicos y fluorométricos. Las especies Solanum
verbascifolium flor, Tecoma stans flor y Cissus verticillata raíz fueron fototóxicas
para Staphylococcus epidermidis pero no para las bacterias Gram negativas Escherichia
coli y Pseudomonas aeruginosa. S. verbascifolium fue la especie más fotoactiva,
ya que indujo una reducción de 5 órdenes de magnitud en el número inicial de
colonias (2,1 x108- 5x108UFC/ml) luego de la TFD con 0,5
mg/ml del extracto y 3 hs de iluminación (5,2 x103-5x103
UFC/ml). Con los extractos metanólicos de T. stans flor (0,5 mg/ml) y C.
verticillata raíz 0,5 mg/ml se indujeron reducciones de 4 órdenes de magnitud
(1,2 x104-2,5x104 UFC/ml y 6,5 x104- 3,3 x104 UFC/ml
respectivamente), (p<0,01, Mann-Whitney test). Los controles positivos con
los FS azul de Toluidina (10 µM) y clorina e6
(10 µM) indujeron una disminución de hasta 7 órdenes de magnitud en las
UFC/ml. Paralelamente, se llevaron a cabo estudios sobre la acción citotóxica
de la luz sobre células de pulmón A549 tratadas con los 3 extractos vegetales,
y se encontró que a las concentraciones fotoinactivantes bacterianas, los extractos
no produjeron fototoxicidad celular. Se determinó la producción de especies
oxidativas totales y oxigeno singulete de los extractos FS luego de la
irradiación. Los extractos de S. verbascifolium, T. Stans y C. verticillata
aumentaron hasta diez veces los valores basales de estado oxidativo total respecto
al control en oscuridad. También se registró producción de oxigeno singulete en
los casos de S. verbascifolium y T. Stans. Estos resultados demuestran el
potencial de las especies vegetales como fuente de sustancias
fotosensibilizantes de bacterias Gram positivas. Actualmente se están llevando
a cabo estudios complementarios de internalización bacteriana intracelular,
para determinar la posibilidad de tratar fotodinámicamente células infectadas
con bacterias de la cepa S. aureus, sin alterar la viabilidad celular.