Incremento del contenido O-glicosídico del interferón-alfa2b humano

DIANELA CRAVERO; AGUSTINA GUGLIOTTA; NATALIA CEAGLIO; MARINA ETCHEVERRIGARAY; RICARDO KRATJE; MARCOS OGGERO

Santa Fe

Encuentro; XVI Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL. VII Encuentro de Jóvenes Investigadores de Universidades de Santa Fe; 2012

Universidad Nacional del Litoral (UNL). Universidad Tecnológica Nacional (UTN). Universidad Católica de Santa Fe (UCSF)

Las múltiples actividades biológicas (antiviral, antiproliferativa e inmunomoduladora) que presentan los interferones (IFNs) han impulsado el desarrollo en forma recombinante de dicha familia de glicoproteínas para su aplicación exógena con fines clínicos en diversas enfermedades virales y tumorales, como es el caso del IFN-alfa2b humano recombinante (rhIFN-alfa2b)obtenido en E. coli (Goodbourn y col., 2000). No obstante, su efectividad terapéutica es limitada dado que poseen una corta vida media en circulación, siendo necesaria la administración de dosis elevadas y frecuentes, con la posible aparición de efectos adversos y la generación de respuesta inmune en pacientes (Sotoca Momblona, 1999). Por este motivo, resulta importante el desarrollo de análogos con mejores características farmacocinéticas, para lo cual han sido desarrolladas distintas estrategias que apuntan, en general, al aumento del tamaño molecular con el fin de reducir la filtración glomerular, principal mecanismo de eliminación de la citoquina. La incorporación de O-glicanos a distintas proteínas constituye un ejemplo exitoso de las mencionadas estrategias. En particular, la adición del péptido carboxi-terminal (CTP) de la subunidad beta de la gonadotropina coriónica humana (hCG), que aporta cuatro sitios de O-glicosilación, ha permitido mejorar la actividad biológica in vivo de la hormona folículo-estimulante, la eritropoyetina y la hormona de crecimiento (Fares y col., 2010), entre otras, sin afectar considerablemente su bioactividad. El objetivo general del presente trabajo consiste en la generación y caracterización de moléculas de interferón-alfa2b humano recombinante (rhIFN-alfa2b) modificadas mediante el agregado de sitios potenciales de O-glicosilación. El incremento del contenido glicosídico tiene como finalidad generar moléculas novedosas, que demuestren una menor velocidad de depuración plasmática y conserven una elevada actividad biológica in vitro, con el propósito de mejorar su eficacia terapéutica. En particular, se propuso la obtención de nuevas moléculas O-glicosiladas de rhIFN-alfa2b utilizando una estrategia de O-glicoingeniería consistente en la fusión de la secuencia que codifica para el péptido CTP al ADNc de la citoquina, en sus extremos N- y C-terminal.