Evaluación de la capacidad funcional de las secuencias promotoras de la toxina Shiga (Stx) en células eucariotas

LETICIA BETANCOR; BILEN MARCOS; MARÍA P. MEJÍAS; ROMINA J. FERNÁNDEZ-BRANDO; GHIRINGHELLI DANIEL; MARINA S. PALERMO

Mar del Plata

Congreso; Reunión anual de SAI-SAIC 2012; 2012

Sociedad Argentina de Inmunologia

Introducción La toxina Shiga está formada por una subunidad A y cinco subunidades B, cada una de las cuales tiene su propia secuencia promotora. Previamente observamos expresión de Stx2B en un entorno eucariota, probablemente debido al reconocimiento de su propio promotor. Objetivo El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de la maquinaria eucariota de reconocer las secuencias promotoras de Stx2 como secuencias promotoras de tipo eucariota. Diseño del estudio Se realizaron construcciones plasmídicas en las cuales se clonó la secuencia codificante para GFP bajo el control de las secuencias promotoras de Stx2A (pr1GFP) y Stx2B (pr7GFP). Con estas construcciones se transfectaron células eucariotas y se observaron por microscopía confocal. Células susceptibles y no susceptibles a Stx2 fueron transfectadas con un plásmido procariota conteniendo la secuencia codificante para Stx2 (pStx2). Se realizaron ensayos de neutralización para evaluar especificidad del efecto citotóxico observado. Resultados Se observó expresión de GFP en células transfectadas con pr1GFP o pr7GFP por microscopía confocal. Observamos efecto citotóxico sobre células Vero transfectadas con pStx2 similar al observado en células incubadas con Stx2 purificada. Al utilizar sobrenadantes y fracciones citoplasmáticas de células transfectadas con pStx2 sobre células Vero naïve, observamos daño citotóxico específico de Stx2 ya que fue neutralizado con suero policlonal contra Stx2 (Stx2 vs Stx2+ anticuerpo P