Mecanismos Endocitóticos y su Relación con el Ciclado Vesicular en Células Cromafines de Ratón.

ANDRÉS PEREZ-BAY; LORENA ITATÍ IBAÑEZ; OSVALDO UCHITEL; FERNANDO MARENGO

Mar del Plata

Congreso; CONGRESO CONJUNTO DE SOCIEDADES BIOMEDICAS; 2004

Los mecanismos endocíticos que recuperan la membrana y las vesículas liberables luego deuna exocitosis masiva no están bien definidos en células cromafines. En este trabajo, pormedio del uso del fluoróforo FM 1-43 se determinó que la célula cromafín es capaz derecuperar totalmente su membrana plasmática luego de una exocitosis masiva (> 70% de lamembrana plasmática) provocada por una despolarización por 3´ con K+ 50 mM (Ca++ 2mM).Una segunda despolarización bajo las mismas condiciones de K+ y Ca++, solamente exocita el32"7% del fluoróforo internalizado, reteniéndose el resto en grandes corpúsculos localizadosy delimitados. La baja liberación de fluoróforo previamente internalizado no se debió a unaexocitosis basal entre ambas estimulaciones, ya que la ausencia de Ca++ en ese período noaumentó esa fracción. Para reducir la cantidad de membrana reciclada, se bajó laconcentración de Ca++ durante el estímulo a 0,5 mM. En estas condiciones las células fueroncapaces de reciclar la totalidad de la membrana exocitada en nuevas vesículas liberables(24"4 vs 21"3%, n=14), lo que se acompañó de una marcada disminución de corpúsculosfluorescentes al final del experimento. Experimentos en los que se reemplazó Ca++ por Ba++confirman estos resultados. En resultados preliminares se observó que la estimulación enpresencia de dextranos fluorescentes (40000 KD) permite marcar (con baja eficiencia)corpúsculos celulares. Estos resultados sugieren la existencia en células cromafines de unproceso endocítico que se activaría en condiciones de alta exigencia a fin de mantener lahomeostasis de la membrana plasmática, pero a la vez incapaz de recuperar el ?pool? liberablede vesículas en el marco temporal de nuestros experimentos. Un proceso de ?bulk?endocitosis, con la consecuente formación de vacuolas y/o cisternas sería un mecanismoposible.