Diferencias en la respuesta inflamatoria de macrófagos frente a patógenos con distinta capacidad invasora

EUGENIA HOVSEPIAN, CRISTINA CERQUETTI, NORA GOREN.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Anual de la SAIC; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Diferencias en la respuesta inflamatoria de macrófagos frente a patógenos con distinta capacidad invasora.   En el transcurso de una infección bacteriana sistémica los macrófagos activados desempeñan un importante papel con una gran producción y liberación de citoquinas y otros mediadores inflamatorios. En este trabajo estudiamos los mecanismos moleculares que participan en la  respuesta inflamatoria de macrófagos frente a patógenos Gram- con diferente capacidad  invasora. Para ello se  infectaron células RAW 264.7 con 10E7 UFC de Salmonella entérica  salvaje (S) y de 2 cepas mutantes con capacidad invasora disminuida (M1 y M2). Mediante Western  blot (Wb), observamos que tanto S como M1 y M2 activan a las MAPK observando la fosforilación de p38 y p42/44 en los 3 casos sin variaciones significativas. En cambio, al estudiar la vía de NFkB por Wb, si bien observamos la desaparición citoplasmática característica de IkBa e IkBb luego de 30 minutos de infección, ésta resulta atenuada para las células infectadas con M1 y M2 respecto a las infectadas con S. Paralelamente se observa una menor translocación al núcleo de la subunidad p65 de NFkB en las células tratadas con M1 y M2 respecto a S.           Luego de 24 h. de infección de las células RAW con las 3 cepas, se detectó mediante Wb la expresión de ciclooxigenasa-2  y óxido nítrico sintasa inducible. Sin embargo la liberación de óxido nítrico (NO) al sobrenadante de las células tratadas con S fue un 75% mayor que la de las células tratadas con M1 y M2. De manera similar los niveles de PGE2  (pg/mg prot.) para las tratadas con S:108,90+17,38, fueron mayores que los de M1:31,3+19,1 y M2:62,2+22,5. Además al evaluar la viabilidad celular  mediante citometría de flujo, observamos que la inducción de apoptosis por parte de S fue significativamente mayor que las M1 y M2 con un p<0,025. Estos resultados nos muestran una mayor respuesta inflamatoria de las células RAW infectadas con S respecto a las cepas de menor capacidad invasora, con una gran producción de NO y PGE2 mediada por NFkB, resultando en una mayor apoptosis.