INVESTIGADORES
SCHWARZBAUM Pablo Julio
congresos y reuniones científicas
Título:
El ADP: un novedoso modulador del volumen celular en células de hepatoma humano Huh-7
Autor/es:
ESPELT MV, ALVAREZ CL, TEZANO PINTOS F, SCHWARZBAUM PJ
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; Reunion anual de la Sociedad Argentina de Fisiologia; 2012
Institución organizadora:
SAFIS
Resumen:
La exposición de células hepáticas y de hepatoma a medios hipotónicos,
induce el aumento del volumen celular seguido de la pérdida de iones
y agua. Esto provoca la disminución regulatoria del volumen celular
(RVD) que tiende a restaurar los valores de volumen a niveles control.
En varios sistemas celulares el RVD puede ser modulado por la interacción
entre nucleótidos extracelulares con receptores purinérgicos P2 y
con enzimas de superficie llamadas eNTPDasas. El objetivo del presente
trabajo es estudiar la variación de volumen en células Huh-7 incubadas
en medio hipotónico (Hypo), y el rol del ATP y/o ADP extracelulares
en el RVD. La exposición de las células a Hypo generó salida de ATP
y aumento del volumen celular seguido de RVD de 40.8±7.80 % a los
40 min (RVD40). En Hypo con apirasa, una enzima que remueve el ATP
y el ADP extracelulares, el RVD fue similar al observado en Hypo solo
(RVD40api=42.2±9.71 %) indicando que el ATP extracelular (ATPe) no
mediaría el RVD. Sin embargo, en presencia de Hypo+Cibacron Blue+-
Suramina (inhibidores de receptores P), se inhibió el RVD sugiriendo
un posible papel de los nucleótidos extracelulares en la respuesta. Las
células incubadas en Hypo+Na+/K+ ATPasa (enzima que cataliza la conversión
de ATP a ADP) mostraron una regulación completa de volumen
(RVD40=106.1±14.31%), sugiriendo un posible rol del ADPe sobre el
RVD. Resultados similares se observaron al agregar el agonista de ADP,
2-Metil tio ADP, mientras que un inhibidor del receptor P2Y13 revirtió
esta activación. Experimentos de RT-PCR mostraron la presencia de
mRNA para el receptor P2Y13 y para eNTPDasa 2 (enzima que princiLa exposición de células hepáticas y de hepatoma a medios hipotónicos,
induce el aumento del volumen celular seguido de la pérdida de iones
y agua. Esto provoca la disminución regulatoria del volumen celular
(RVD) que tiende a restaurar los valores de volumen a niveles control.
En varios sistemas celulares el RVD puede ser modulado por la interacción
entre nucleótidos extracelulares con receptores purinérgicos P2 y
con enzimas de superficie llamadas eNTPDasas. El objetivo del presente
trabajo es estudiar la variación de volumen en células Huh-7 incubadas
en medio hipotónico (Hypo), y el rol del ATP y/o ADP extracelulares
en el RVD. La exposición de las células a Hypo generó salida de ATP
y aumento del volumen celular seguido de RVD de 40.8±7.80 % a los
40 min (RVD40). En Hypo con apirasa, una enzima que remueve el ATP
y el ADP extracelulares, el RVD fue similar al observado en Hypo solo
(RVD40api=42.2±9.71 %) indicando que el ATP extracelular (ATPe) no
mediaría el RVD. Sin embargo, en presencia de Hypo+Cibacron Blue+-
Suramina (inhibidores de receptores P), se inhibió el RVD sugiriendo
un posible papel de los nucleótidos extracelulares en la respuesta. Las
células incubadas en Hypo+Na+/K+ ATPasa (enzima que cataliza la conversión
de ATP a ADP) mostraron una regulación completa de volumen
(RVD40=106.1±14.31%), sugiriendo un posible rol del ADPe sobre el
RVD. Resultados similares se observaron al agregar el agonista de ADP,
2-Metil tio ADP, mientras que un inhibidor del receptor P2Y13 revirtió
esta activación. Experimentos de RT-PCR mostraron la presencia de
mRNA para el receptor P2Y13 y para eNTPDasa 2 (enzima que principalmente
hidroliza ATP a ADP). Por otro lado, en medio hipotónico la
concentración de ATPe aumentó 2.4 veces y la de ADPe 39 veces sobre
el valor isotónico basal. Tanto la Brefeldina A (inhibidor de la exocitosis)
como el carbenoxolone (inhibidor de Panexina1) inhibieron parcialmente
la salida de ATP. Los resultados muestran por primera vez al ADP extracelular
como molécula activadora del RVD a través de su interacción con
el receptor P2Y13. En cuanto al origen del ADPe, se postula que el medio
hipotónico induciría la salida de ATP por al menos dos vías, y que el ATPe
resultante podría ser convertido a ADPe por medio de la eNTPDasa 2.
Realizado con subsidios UBACYT (20020100100090), CONICET (PIP1187)
y ANPCyT (0151).