La retracción reversible de procesos en oligodendrocitos inducida por estrés oxidativo no-letal está mediada por la fosforilación de CRMP-2 en un sitio sustrato de Rho-quinasa

FERNÁNDEZ GAMBA, A; LEAL, MC; DE TULLIO, M ; ROHER, A; MORELLI, L; CASTAÑO, EM.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2011

Los oligodendrocitos (OLG) forman la vaina de mielina en axones, proceso esencial para la integridad neuronal. El estrés oxidativo agudo podría causar una mielinización inadecuada y por ende, una disfunción neuronal. Objetivos: 1) Caracterizar el efecto de la acumulación de especies reactivas de oxígeno (ROS) sobre la extensión de procesos de OLG primarios y de la línea OLN-93. 2) Analizar el proteoma de OLG en condiciones de estrés oxidativo agudo. Metodología: Exposición a ácido 3-nitropropiónico (3-NP), detección de ROS por diacetato de 2?7?diclorofluoresceína, viabilidad celular, microscopía confocal y análisis de imágenes. Proteómica por 2D-DIGE, digestión tríptica y espectrometría de masa. Caracterización de fosforilación por Western blot. Inhibición farmacológica de quinasas. Transfección de OLN-93 con mutante de CRMP-2. Resultados: El tratamiento con 3-NP (1 mM/1h) 1) no afectó la viabilidad de OLG, indujo peroxinitritos, disminuyó el diámetro de OLG y la longitud de procesos de OLN-93 en forma reversible. Este efecto fue prevenido por un análogo hidrosoluble de vitamina E y por N-acetil-cisteína, un precursor de glutatión. 2) El análisis proteómico mostró aumento de CRMP-2 (1.76 veces) y disminución de proteína ribosomal SA (-2.0 veces) en OLG tratados con 3-NP respecto al control. 3) La forma fosforilada de CRMP-2 en T555 aumentó 40% con 3-NP (p