Análisis proteómico de cepas linaje TCI de patogenicidad diferencial: Una prueba más a favor del sistema redox como factor de virulencia

ZAGO, MP; DHIMAN M; SUAREZ G; PIÑEYRO, MD; ROBELLO,C; BASOMBRIO,MA; GARG, N

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2011

Una forma de abordar el estudio de la patogenicidad de T.cruzi sería revelar en que grado las diferencias genéticas/proteómicas entre los aislados infectivos son responsables de las variaciones en el tropismo tisular y en la severidad de la enfermedad. Propusimos así un análisis proteómico acoplada a espectrometría de masa para la identificación de factores de T. cruzi responsables de infectividad, tropismo miocárdico y virulencia del parásito. Iniciamos este trabajo mediante la estrategia tradicional de geles bidimensionales acoplada a su identificación por espectrometría de masa. Se seleccionaron para este trabajo cepas de linaje I (TCI) con distinto comportamiento en modelos murino (no patógena a extremadamente patógena y resistente a tratamiento. Se realizó el estudio sobre tres cepas (TCC, atenuada; Sylvio y Colombiana, virulentas) tanto en estadio no infectivo (epimastigotes) como en tripomastigotes derivados de cultivo celular. Aproximadamente el 39% de los spots fueron diferentes al comparar los estadíos. Varias proteínas asociadas a resistencia a tratamiento a metabolismo y al estadio tripmastigote se hallaron con diferencias significativas entre las cepas pero el hallazgo mas significativo se correspondió con una hipótesis ya presentada por nosotros: la asociación entre la virulencia de T.cruzi y su sistema antioxidante. El perfil bidimensional de las cepas virulentas en estadio infectivo mostró una mayor expresión de las proteínas asociadas al estrés oxidativo comparada con el de la cepa no virulenta. Confirmamos este resultado por western blot con anticuerpos dirigido a distintas proteínas del sistema (APX, TcMPX, TcCPX, etc) y estamos determinando las actividades de componentes del sistema. Para confirmar estos hallazgos donde las cepas virulentas deberían ser más resistentes a la primera barrera de defensa impuesta por el macrófago, infectamos macrófagos murinos Raw 264. Para evaluar la susceptibilidad de las cepas al insulto oxidativo, determinamos estrés oxidativo global, sensibilidad a los distintos oxidantes y capacidad infectiva en cultivos de mioblastos C2C12, hallando en todos los casos una correlación positiva entre infectividad y mayor capacidad antioxidante de la cepa. Debido a que los resultados hallados se correspondieron a proteínas de mayor abundancia, se está realizando en forma paralela el estudio mediante una nueva estrategia de separación de proteínas (PF2D Lab) cuyo objetivo es encontrar proteínas de baja abundancia y noveles aún no publicadas que permitan aportar nuevas explicaciones a los comportamientos de estas cepas. La caracterización de estas proteínas permitiría en el futuro la identificación de marcadores diagnósticos predictivos de patrones de la enfermedad como así también proveería de nuevos blancos para desarrollo de drogas y vacunas contra T.cruzi.