Las proteínas 54K y 55K de los ophiovirus CPsV y MLBVV interaccionan in vivo con la proteína Plasmodesmata located protein 1 (PDLP1)

ROBLES LUNA G.1, PEÑA E.J.2, DE FRANCESCO A.1, OCOLOTOBICHE E.E.1, BORNIEGO M.B.1, REYES C.A.1 Y M.L. GARCÍA

Congreso; COngreso ARGENTINO DE VIROLOGIA; 2011

Introducción: El ensanchamiento de las nervaduras (BV, big-vein) es una de las enfermedades que mayor daño causa en el cultivo de lechuga. El agente causal es Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV), un virus multipartito (4 RNAs) con genoma a RNA de polaridad negativa, miembro de la familia Ophioviridae. En el RNA2 se encuentra el gen de la proteína denominada 55K (55 kDa) cuya función se desconoce. El virus tipo de esta familia, Citrus psorosis virus (CPsV) contiene la misma organización genómica, encontrándose en el RNA2, el gen de la proteína 54K (54kDa), de la cual contamos con evidencias que indican su función en el movimiento viral. Objetivo: Caracterizar las proteínas virales y determinar su localización subcelular con el objeto de aportar evidencias acerca de su función en el ciclo viral. Metodología: Las proteínas virales fusionadas a proteínas fluorescentes (eGFP y RFP) en plásmidos binarios fueron expresadas en forma transitoria en hojas de Nicotiana benthamiana mediante agro-infiltración. Luego de 2 y 3 días post agroinfiltración las hojas se observaron con un microscopio confocal ó en microscopio invertido realizando medidas de Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM). Resultados: Las proteínas 54K y 55K de CPsV y MLBVV se localizaron en plasmodesmos (PD) ya que co-localizaron con la proteína Plasmodesmata located protein 1 (PDLP1) fusionada a RFP, utilizada como marcador de PD. La proteína PDLP1 pertenece a la familia de PDLPs, descriptas como proteínas estructurales del PD que regulan el tráfico célula a célula. En aquellos virus que se mueven por túbulos (Amari et al, 2010) las PDLPs mediarían el movimiento a la célula vecina, específicamente, mediante interacciones directas PDLP con la proteína de movimiento viral (MP). Dado que estos túbulos se componen de subunidades de la MP, estudiamos la interacción in vivo de la proteína PDLP1:RFP con las proteínas 55K y 54K, además de la interacción entre ellas mismas. Midiendo FLIM y calculando el %FRET (eficiencia de transferencia de energía) se determinó que las proteínas 54K y 55K interaccionan con PDLP1, y se detectó la interacción 54K-54K y 54K-55K, indicando que habría un dominio de unión que permite la homo-oligomerización en plasmodesmos. Conclusiones: Las proteínas codificadas en el RNA2 de los ophiovirus estudiados se localizan en plasmodesmo e interaccionan con PDLP1 al igual que en los virus guiados por túbulos. Estos resultados aportan evidencias de que estas proteínas se encuentran involucradas en el movimiento viral célula a célula.