Análisis de la N-Glicosilación de una variante de eritropoyetina humana recombinante con reducida actividad eritropoyética y conservada acción neuroprotectora

MATTIO, MÓNICA; CEAGLIO, NATALIA; OGGERO, MARCOS; PEROTTI, NORMA; FORNO, ÁNGELA GUILLERMINA; KRATJE, RICARDO; ETCHEVERRIGARAY, MARINA

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de SAIC Reunión Científica Anual 2011 de SAFIS II Congreso Nacional y IV Reunión Científica Regional por el Bienestar del Animal de Laboratorio y el Progreso de la Ciencia de la Asociación Argentina de Ciencia de la AACYTAL; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS) Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AACYTAL)

La eritropoyetina humana recombinante (rhEPO) es una molécula que exhibe un amplio espectro de acciones terapéuticas, entre ellas capacidad neuroprotectora. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un proceso de purificación de una variante de rhEPO, que denominamos neuroepoetin (rhNEPO), caracterizada por un perfil de glicosilación diferente a rhEPO, mayor velocidad de depuración plasmática y escasa actividad estimulante de la hematopoyesis. En el presente trabajo, se propuso analizar las estructuras N-glicosídicas presentes en la rhNEPO con el fin de correlacionarlas con la menor vida media plasmática de la molécula y su consecuente menor actividad eritropoyética. Para ello, los oligosacáridos de tipo N se liberaron mediante tratamiento enzimático y se analizaron mediante HPAEC-PAD en condiciones nativas. La rhNEPO demostró mayor contenido de estructuras neutras, mono-, di- y tri-sialidadas (en total 81,4% vs. 30% existentes en rhEPO). En consecuencia, la rhNEPO evidenció menor porcentaje de oligosacáridos tetrasialidados (13,6%) con respecto a la rhEPO (58,1%). El análisis de los oligosacáridos neutros demostró mayor proporción de estructuras menos ramificadas (di- y tri-antenarias) en la molécula con menor actividad eritropoyética con respecto a la rhEPO (49,0 % vs. 23,4%, respectivamente). Teniendo en cuenta que tanto el tamaño como tipo de ramificación y el contenido de ácido siálico terminal de los N-glicanos son factores determinantes de la vida media plasmática de una proteína, se pudo concluir que el diferente perfil de glicosilación de la rhNEPO incrementa su clearance plasmático y, en consecuencia, disminuye su capacidad hematopoyética. No obstante, a pesar de su reducida vida media en plasma, la rhNEPO ingresa al líquido cefalorraquídeo más rápidamente que su contraparte hematopoyética en concentraciones dentro del rango de citoprotección, postulándose como posible candidato para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central.