IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Purificación y caracterización de la proteína NS1 del virus respiratorio sincicial humano
Autor/es:
ESTEBAN PRETEL; MARIANA GALLO; DANIEL CICERO; GONZALO DE PRAT GAY
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de Biofísica; 2011
Resumen:
El virus respiratorio sincicial humano (RSV) es el agente causal mas
importante de enfermedad respiratoria pediátrica en el mundo. El virus
codifica a dos proteínas no estructurales: NS1 y NS2 las cuales solo se
encuentran en RSV. Ambas participarían en la supresión tanto de la
producción como señalización de interferón. A pesar de su relevancia, hasta
el momento no se conocen estudios que analicen en profundidad la
estructura de estas proteínas, así como falta información acerca de su
función y de los mecanismos en que los efectos mencionados se producen.
En el presente trabajo se muestra la purificación y caracterización inicial de
la proteína NS1 A2. La misma fue expresada en la cepa C41 de E. coli
utilizando el vector pET-15 b. Se obtuvo un buen rendimiento de proteína
utilizando en pasos sucesivos precipitación fraccionada con sulfato de
amonio al 50%, columna de afinidad por Níquel, corte con trombina y
filtración por tamiz molecular. NS1 es una proteína monomérica estable en
un amplio rango de ph, mostrando un desplegamiento cooperativo cuando
se la expone a agentes caotrópicos como cloruro de guanidinio. El aumento
de temperatura provoca un cambio irreversible que se refleja tanto en su
estructura secundaria como cuaternaria. Para su estudio por RMN se puso a
punto la expresión en medio mínimo y marcación con 15N y 13C. Se
analizaron diferentes condiciones en relación a temperatura, estabilidad y
pH que servirán como punto de partida para realizar los experimentos de
asignación.