INVESTIGADORES
GONZALEZ LEBRERO Rodolfo Martin
congresos y reuniones científicas
Título:
Oclusión de Rb+ por la Na+/K+-ATPasa y su modulación por el ATP
Autor/es:
AJ SPIAGGI; RODOLFO M GONZÁLEZ LEBRERO; PJ. GARRAHAN; RC ROSSI
Reunión:
Congreso; XL reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2011
Resumen:
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La Na+/K+ATPasa es una proteína
intrínseca de la membrana plasmática que cataliza el intercambio
secuencial de tres iones Na+ del interior celular por dos iones K+
del exterior en forma acoplada a la hidrólisis de una molécula de
ATP. Este proceso conlleva la formación de intermediarios donde los
iones transportados se hallan ocluidos, esto es, son inaccesibles de
un lado u otro de la membrana. La desoclusión de los iones K+ para
regenerar la enzima libre es el paso limitante del ciclo de
reacciones, y es acelerada marcadamente por la unión de ATP a un
sitio modulador de baja afinidad. Para entender más acabadamente el
mecanismo por el cual el ATP ejerce ese efecto estudiamos cómo
influye el nucleótido sobre la velocidad de la reacción inversa: la
oclusión de K+ por la enzima libre (ruta directa de oclusión). Para
ello empleamos Rb+ como congénere del K+ y, dada la elevada
velocidad del proceso de oclusión, un equipo de mezclado rápido
acoplado a una cámara de frenado y lavado (1) que permitió estudiar
la reacción en la escala de los milisegundos. Los resultados, que
confirman y amplían evidencia previa (2,3), sugieren que:
1. los sitios de unión de Rb+ poseen
baja afinidad y muestran una marcada interacción negativa.
2. la unión del ATP a la Na+/K+ATPasa
no modifica la afinidad de los sitios por el Rb+
3. es posible la formación de especies
con uno o dos iones Rb+ ocluidos tanto en presencia como en ausencia
de ATP
4. el ATP causa una disminución de la
velocidad de formación de especies con un solo Rb+ ocluido, pero
acelera la formación de especies con dos iones Rb+ ocluidos,
favoreciendo la relación 2 Rb+/unidad de enzima.
Esta información permitió elaborar y
ajustar un modelo cinético que explica adecuadamente los resultados
experimentales.