La regulación de leptina por AMPc involucra un entrecruzamiento entre las vías de PKA y MAPK”

JULIETA MAYMÓ; ANTONIO PÉREZ-PÉREZ; VÍCTOR SÁNCHEZ-MARGALET; JUAN CARLOS CALVO; CECILIA VARONE

Mar Del Plata

Congreso; LV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

SAIC

La leptina (LEP), una proteína de 16 kDa producida principalmente por el tejido adiposo, ha sido relacionada inicialmente con el control del balance energético. Sin embargo, se han identificado efectos pleiotrópicos de la leptina en reproducción y embarazo, particularmente en la placenta humana, donde su expresión es altamente regulada. La activación de la vía del AMPc coordina procesos celulares y media la acción de diversas hormonas en la placenta. En el presente estudio, examinamos el efecto del AMPc en la regulación de la expresión de leptina en trofoblastos humanos así como los mecanismos involucrados. Utilizamos como modelo de trabajo las líneas celulares trofoblásticas BeWo y JEG-3 así como explantos de placenta a término. Por Western blot y qRT-PCR, determinamos que AMPc (1-100µM) estimuló la expresión de la leptina en células BeWo y JEG-3. EL AMPc incrementó la actividad del promotor de LEP (4,2 veces), evaluado por ensayos de gen reportero con plásmidos conteniendo el promotor de LEP y el gen luc. Obtuvimos resultados similares con explantos de placenta humana. Analizamos la vía de la PKA y hallamos que la fosforilación de CREB es aumentada significativamente con AMPc. Más aún, la cotransfección con la subunidad catalítica de PKA o con CREB estimuló la actividad del promotor de LEP (42,5 y 58 veces respectivamente). El H89 10µM (inhibidor de PKA) o el SQ22,536 100µM (inhibidor de AC) bloquearon el efecto del AMPc. Investigamos el rol de la vía de la MAPK en el efecto del AMPc en la inducción de leptina. Por WB y ensayos de gen reportero, observamos que el PD98059 50µM (inhibidor de MEK) bloqueó parcialmente la estimulación de leptina por AMPc. El tratamiento con AMPc indujo la fosforilación de ERK 1/2 (2,3 veces) y el PD98059 inhibió la fosforilación de CREB inducida por AMPc. En resumen, demostramos que el AMPc induce la expresión de leptina en placenta y este efecto sería mediado por un entrecruzamiento entre las vías de señalización de PKA y de MAPK.