La autofagia mediada VMP1 es un mecanismo de defensa celular en pancreatitis aguda

GRASSO, D.; ALEJANDRO JAVIER ROPOLO; SACCHETTI, M.L.; LO RE, A.; PARDO, R.; BOGGIO, V.; VACCARO, M. I.

Buenos Aires, Argentina.

Congreso; Congreso Argentino de Gastroenterología y Endoscopía Digestiva 2008; 2008

Sociedad Argentina de Gastroenterología

La autofagia es un proceso degradativo de constituyentes citoplasmáticos, la cual sirve como un mecanismo de sobrevida ante la privación de nutrientes en células y es caracterizada por el secuestro de porciones citoplasmáticas y organelas en vesículas de doble membrana llamadas autofagosomas. La autofagia ha sido asociada a una variedad de procesos patológicos incluyendo la pancreatitis aguda tanto humana como experimental. El gen VMP1 (Vacuole Membrane Protein 1) es tempranamente activado en la célula acinar durante la pancreatitis aguda. Recientemente demostramos que VMP1 es una nueva proteína relacionada a la autofagia, la cual se localiza en las membranas de las vesículas inducidas por la pancreatitis. VMP1 es una proteína de membrana que gatilla la formación de autofagosomas en células de mamíferos. El objetivo de este trabajo fue estudiar el rol de la autofagia mediada por VMP1 en células acinares pancreáticas durante la pancreatitis experimental. Realizamos estudios en una línea de células acinares de rata y en una colonia de ratones transgénicos que expresan el gen VMP1 en páncreas exocrino. Células AR42J fueron cultivadas en condiciones óptimas de nutrientes y factores de crecimiento y tratadas con dosis crecientes de ceruleina (CAE) en función del tiempo. Encontramos que CAE induce la expresión de VMP1 en células AR42J mediante análisis de Western blot y RT-PCR. También encontramos que el tratamiento con CAE induce autofagia, demostrada por el reclutamiento de pRFP-LC3 y Western blot de LC3 endógena. Además, utilizando las estrategias de azul tripan y naranja de acridina, vimos que el tratamiento con 7.5 uM de CAE conduce a la muerte celular (50% a las 5 horas de tratamiento). Con el objetivo de saber si VMP1 está directamente involucrada en la autofagia inducida por CAE, la expresión de VMP1 fue silenciada utilizando un siRNA específico. Encontramos que la reducción de la expresión de VMP1 bloqueó la autofagia inducida por CAE. Asimismo las células deficientes en VMP1 presentaron una disminución significativa de la sobrevida al ser sometidas al tratamiento con CAE. Por otro lado, la pancreatitis aguda inducida por CAE en el ratón transgénico mostró que la expresión de VMP1 indujo autofagia y previno la necrosis característica del modelo. Finalmente, en el ratón transgénico disminuyó significativamente el infiltrado inflamatorio en el tejido comparándolo con el ratón wild-type. Nuestros resultados sugieren que la autofagia mediada por la expresión de VMP1 es un mecanismo de defensa que las células pancreáticas activan en respuesta a la pancreatitis experimental.