INHIBICIÓN IN VITRO DE LA EXPRESIÓN DE SPARC (SECRETED PROTEIN, ACIDIC AND RICH IN CYSTEINE) EN CÉLULAS ESTRELLADAS HEPÁTICAS. EFECTOS BIOLÓGICOS

CATALINA ATORRASAGASTI, ALEJANDRA CAMINO, JORGE B. AQUINO LAURA ALANIZ, MARIANA MALVICINI, MIGUEL RIZZO, PABLO MATAR, OSVALDO PODHAJCER, MARCELO SILVA, GUILLERMO MAZZOLINI.

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clinica (SAIC)

Introducción: Hemos observado previamente que la transferencia génica mediada por adenovirus de una secuencia antisentido para SPARC (AdasSPARC) fue capaz de atenuar el proceso necroinflamatorio y disminuir la fibrosis hepática en un modelo de intoxicación crónica con TAA (tioacetamida) en ratas (Camino A 2008, J. of Gene Med, 10:993-1004). La células estrelladas hepáticas (CE) desempeñan un papel fundamental en el proceso fibrogénico hepático. Objetivos: Explorar in vitro en CE los mecanismos de atenuación de la fibrosis al inhibir SPARC. Materiales y Métodos: Se utilizó una línea de CE, denominada CFSC-2G. La expresión de SPARC fue evaluada por qPCR e inmunofluorescencia. Se utilizó el AdasSPARC para inhibir la proteína. Para incrementar la inhibición de SPARC se emplearon ARN de interferencia específico (siRNA). Se estudió la expresión de la citoquina TGF-1 por ELISA. Se evaluó proliferación celular por el método de incorporación de timidina tritiada y la migración en cámaras transwell. Resultados: AdasSPARC redujo en un 50% la expresión de SPARC a los 5 días de la infección comparado con los controles. Esto se correlacionó con disminución en la secreción de TGF-1, principal citoquina fribrogenica, comparado con Ad-gal (vector control). El siRNA redujo la expresión del ARNm de SPARC a las 72 hs (80% de reducción vs. control). La migración de las células CFSC-2G transfectadas con siRNA disminuyó significativamente (p=0,003), así como la respuesta migratoria a TGF-1. La secreción de TGF-1 en el sobrenadante de las células transfectadas con el siRNA para SPARC fue menor que las tratadas con el siRNA control. Conclusiones: La regulación negativa de la expresión de SPARC en CE resulta en una disminución de la capacidad migratoria de las células estrelladas activadas, especialmente en respuesta a TGF-1, así como la producción de TGF-1. SPARC podría ser considerada un nuevo blanco terapéutico en fibrosis hepática.