Invasión de Neospora caninum en cultivos celulares primarios de trofoblasto caprino

ÁLVAREZ, B.; RAMBEAD, M.; CAMPERO, L.M.; VENTURINI, M.C.

La Plata

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología (SAP); 2023

SAP

El parásito apicomplexa Neospora caninum es responsable de abortos en vacunos y, en menor proporción, en otros rumiantes como cabras, ovejas y ciervos. En nuestro país se aislaron dos cepas de origen vacuno, NC-Argentina LP1 y NC-Argentina LP2. Si bien la virulencia de dichos aislados se ha caracterizado en líneas celulares, no existe información sobre su comportamiento en cultivos primarios placentarios, siendo ésta una de las principales poblaciones celulares blanco en la interacción parásito-hospedador, pudiendo resultar en un aborto o transmisión congénita. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar la tasa de invasión de NC-Argentina LP1 con respecto a la cepa de referencia NC-1 en cultivos primarios provenientes de trofoblasto caprino. Se realizó el cultivo primario a partir de cotiledones de una cabra seronegativa a N. caninum y Toxoplasma gondii mediante el método de explante. Se sembraron 105 células placentarias (pasaje 4) por pocillo en placas de 24 pocillos hasta lograr su confluencia (48 hs). Luego se infectaron los cultivos (3 réplicas) con 104 taquizoítos/pocillo de cada cepa en 3 ensayos independientes. A las 48 hs post-infección se cuantificó la tasa de invasión realizando el inmunomarcaje de vacuolas parasitóforas (VP) con un suero hiperinmune anti-N. caninum y el conjugado correspondiente (Alexa Fluor 488, Life Technologies) y tinción DAPI. Se contabilizaron 50 campos por réplica y se cuantificó el tamaño de las VP. La cepa NC-Argentina LP1 mostró menor tasa de invasión que la cepa de referencia (5.9 versus 21 respectivamente; p