Prototipo de ELISA sándwich basado en nanoanticuerpos para la detección de antígeno del Virus de la Hepatitis E de transmisión zoonótica

ARCE, LORENA PAOLA; BRANCHER, MATÍAS; PAVAN, MARÍA FLORENCIA; BOK, MARINA; PARREÑO, VIVIANA; VIZOSO PINTO, MARÍA GUADALUPE; IBAÑEZ, LORENA ITATÍ

Tandil

Jornada; XIV Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria, II Reunión de la Red Latinoamericana de Inmunología Veterinaria; 2022

El Virus dela Hepatitis E (HEV) es un virus zoonótico emergente causante de hepatitisaguda. La detección del antígeno de la cápside (ORF2 glicosilada) que circulalibre en plasma o de la partícula viral en heces permite diagnosticar lainfección. Recientemente, obtuvimos nanoanticuerpos (VHHs) contra ORF2. Nuestroobjetivo fue desarrollar un prototipo de inmunoensayo basado en VHHs para la detecciónde antígeno. ORF2 HEV-3 fue expresada en células HEK293 y purificada mediantecromatografía de afinidad. Se seleccionaron 6 VHHs anti-ORF2 según la regióndeterminante de complementariedad (CDR3) y se realizó la expresión, purificacióny modificación con diferentes etiquetas (unión a plástico (VHHPSW) y unión abiotina (VHHbio)). La afinidad de los VHHs sin modificar se evaluó medianteELISA indirecto, brevemente se sensibilizó con diferentes concentraciones deORF2 (on 4°C), bloqueo con leche 5 %, luego se añadió diferentesconcentraciones de VHHs y finalmente se incubó con anti-HisHRP. Los VHHs con ysin modificaciones que presentaron mayor afinidad por la proteína, se usaronpara un prototipo de ELISA sándwich para la detección de antígeno. Se probaron:tipo de placa y concentraciones variables de los siguientes reactivos: VHH,VHHPSW, agente bloqueante, ORF2 glicosilada, VHHbio y anticuerpos streptavidinaHRP. Las concentraciones preliminares para el ELISA sándwich fueron:concentración del VHHPSW 0,1 ug/ml, gelatina 1 %, VHHbio 1/200 y estreptavidinaconjugada 1/10000. El límite de detección fue 100 ng/ml de ORF2 glicosilada.Desarrollamos un prototipo para detección de antígeno de HEV que luego de servalidado podrá ser usado en muestras de suero y heces para el diagnóstico ypronóstico de la infección por HEV. Esta herramienta es de utilidad para elcontrol de la transmisión zoonótica del HEV-3.