Desarrollo de un ELISA competitivo indirecto multiespecie para la detección de anticuerpos totales contra el virus de la hepatitis E

ARCE, LORENA PAOLA; PAVAN, MARÍA FLORENCIA; BOK, MARINA; PARREÑO, VIVIANA; GUTIÉRREZ, SE; ESTEIN, SM; TAMMONE SANTOS A; CONDORÍ WE; UHART MM; VIZOSO PINTO, MARÍA GUADALUPE; IBAÑEZ, LORENA ITATÍ

Vaquerías Códoba

Workshop; XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2022

SAV

El virus de la hepatitis E (HEV) es unvirus zoonótico y emergente causante de hepatitis aguda. La serología para elHEV es de gran importancia tanto en estudios epidemiológicos como paracontrolar la transmisión de la enfermedad. Recientemente, obtuvimos nanoanticuerpos(VHHs) contra la proteína de cápside (ORF2) del HEV genotipo 3 (HEV-3) paradesarrollar un ELISA competitivo (cELISA) que permita detectar inmunoglobulinastotales (Ig) de distintas especies animales. ORF2 HEV-3 fue expresada ypurificada usando la resina NiNTA. Después de inmunizar una llama con ORF2 soluble,se construyó una librería de VHHs y se seleccionaron los VHHs específicos paraORF2 mediante la técnica de pannig con display de fago. Los VHHs anti-ORF2 fueronexpresados en E. coli TG1, evaluados por ELISA indirecto y los clones positivos enviados asecuenciar. Se expresaron y purificaron VHHs anti-ORF2 seleccionados según laregión hipervariable determinante de complementariedad 3 (CDR3). Se puso apunto el cELISA considerando: concentraciones de ORF2 y de VHHs, agentes bloqueantes,dilución de suero y de Ac secundario (anti-HisHRP). Para la validación delcELISA (cut-off, sensibilidad, especificidad, AUC, grado de concordancia, precisión ylímite de detección) se empleó un panel de sueros caracterizados con el kit DIAPRO.Finalmente, se analizaron 62 muestras de pacientes con hepatopatías y sueros dediferentes animales: cerdo, jabalí, ciervo y ratón. De los 6 VHHs anti-ORF2, seseleccionó el VHH11 y se establecieron las siguientes condiciones para elcELISA: ORF2 HEV-3 0,05 ug/ml, VHH11 60 ng/ml, suero sin diluir, leche 5%(agente bloqueante) y dilución del Ac conjugado 1/10000. Mediante análisis ROC (CaracterísticaOperativa del Receptor) calculamos una sensibilidad de 97,4 %, especificidad95,8 %, cut off de 69,16% y buena capacidad discriminativa debido a su AUC (áreadebajo de la curva) de 0,976. La variabilidad intra e interensayo calculadomediante el coeficiente de variación (CV) fue < 10% y <15%,respectivamente, lo que indicó que el inmunoensayo es preciso. El índice kappafue de 0,93indicando un buen grado de concordancia con respecto al kit comercial; aunquesu límite de detección fue menor que el kit DIAPRO. Con el cELISA se determinóuna seroprevalencia de 8% en pacientes con hepatopatías (5/62). También fue posiblediferenciar muestras seropositivas y negativas en todos los animales testeados.Reportamos por primera vez la aplicación de VHHs contra el HEV-3 en uninmunoensayo y desarrollamos un cELISA multiespecie para detectar Ig anti-HEV-3que puede ser usado tanto en humanos con fines epidemiológicos como en el ámbitoveterinario para prevenir y controlar la transmisión zoonótica por el HEV-3